湖南复杂基质支原体检测核酸扩增法

支原体检测培养法是生物制剂质量控制的关键环节，湖州申科提供的 USP 支原体培养法检测服务，严格遵循USP<63 mycoplasma tests（culture method）>标准，为生物制剂开发与生产提供可靠保障。该方法适用于检测组织或细胞培养物、消化肉液及其他疑似支原体污染的材料，是确保生物技术产品及生产用材料合规性的必要要求。检测周期约 29 天，流程需满足双重要求：每批次培养基必须进行营养特性测试，确保检测效能；供试品需完成抑制物质检测，若生产方法发生变化可能影响检测结果，需重复该测试，避免抑制成分干扰支原体检出，保障检测结果的准确性与可靠性。

支原体 NAT 检测的特异性验证面临主要挑战：需设计覆盖多种支原体的 PCR 引物，而覆盖范围越广，越可能因支原体与革兰氏阳性菌的系统进化相关性，出现交叉检测现象，影响结果准确性。因此，特异性验证需重点排查非目标微生物的干扰，确保检测结果的专一性。稳健性验证同样关键，需证实检测方法在人为引入的微小参数变化（如反应温度、试剂浓度波动等）下，仍能保持结果稳定，避免因实验条件差异导致的检测偏差。这两项验证直接决定了 NAT 方法在不同实验室、不同操作场景下的适用性，是其获得法规认可的重要前提。

针对不同类型的样品基质，需采用定制化的支原体检测前处理方案，以消除干扰、提升检测效果。细胞悬液需经热处理、样品处理液作用、细胞碎片去除、浓缩离心，再 55℃消化；上清或高浓度质粒样品需先浓缩离心，再用样品处理液作用后 55℃消化；5% 人血白蛋白样品则采用浓缩离心 + 样品处理液作用 + 25℃消化的流程。常见干扰基质包括冻存保护剂、高浓度细胞、代谢产物等，优化前处理可遵循三大原则：提取前通过离心取上清或去除抑制剂预处理样品；高浓度蛋白样本提取时增加蛋白酶 K 用量，增强蛋白降解效果；细胞类样品适当降低细胞数或先裂解细胞，减少细胞基质对检测的干扰。

湖州申科构建了覆盖全领域、全场景的支原体检测一站式合规解决方案。产品矩阵丰富，包括支原体 DNA 提取纯化试剂盒（2G）、检测试剂盒（2G，PCR - 荧光探针法）、DNA 校准品、一体化检测卡盒、外源因子全自动核酸分析系统，以及 10 余种支原体验证菌株（已上市猪鼻、肺炎、口腔支原体等，即将上市发酵、精氨酸支原体等）。方案具备极强的场景适配性，可应对 5% 人白、高浓度细胞等复杂基质样品，支持从起始材料到终产品的全流程检测，满足细胞疗法、抗体、疫苗、CRO/CDMO 等不同领域的检测需求。服务层面，提供从方法学建立、样品检测、适用性验证、传统法与 qPCR 法比对到特殊菌株定制的全流程技术支持，配合企业完成监管机构现场审计，满足企业从 IND 到 BLA/NDA 的申报需求，实现 “极简操作、一步加样、避免污染、全量检测” 的价值。

湖州申科的支原体验证菌株以高稳定性与合规性为重点优势，满足 NAT 方法验证需求。菌株来源可靠，均取自国内外合规机构验证菌株标准盘，溯源至美国 ATCC（口腔、肺炎支原体）、中国 CVCC（猪鼻支原体）等正规保藏机构，获正式商用授权，标定浓度涵盖 10CFU 与 100CFU。生产环境合规，在 BSL-2 生物安全实验室开展，符合国家生物安全法标准，针对不同菌株特性逐个优化生产工艺，涵盖超 10 种菌株的主代与工作代。质控环节严谨，采用高灵敏度培养基（液体、固体、半流体），保障菌落易观察分离与 CFU 计数准确性；冻存前后均通过固体平皿培养法测定 CFU，联合合规机构建立数字 PCR 标定方法，经实验室间对比验证，准确监控 GC/CFU 比，确保菌株质量达标。

湖州申科外源因子全自动核酸检测分析系统打造了 “样本进、结果出” 的高效检测流程，彻底简化支原体检测操作。检测只需一步式加样，最大支持 1mL 样本直接上样，无需复杂前处理，加样后系统自动完成核酸提取与检测，全程 3 小时内即可获取结果，其中样本准备时间不足 5 分钟，检测流程只需 2.5 小时。相比传统方法水浴消化、磁珠分离、洗脱等繁琐步骤，该系统操作极大简化，且配备 UI 触屏控制系统，内置标准化程序，支持扫码启动检测，无需专业 qPCR 操作培训，普通人员经简单指导即可上手。系统采用 4 通道单独运行设计，可同步开展不同样本检测，仪器还支持叠加延展通道，进一步提升检测产能，适配生物药多批次检测需求。