上海细菌内毒素检测技术升级

样品中存在的非特异性鲎反应启动物，会绕过内毒素直接触发鲎试剂反应，导致内毒素检测出现假阳性，需针对性消除干扰。常见的非特异性启动物包括 1,3-β-D 葡聚糖和含丝氨酸蛋白酶的生物制品（如胰酶）：1,3-β-D 葡聚糖会启动鲎试剂的 G 因子旁路，不依赖内毒素即可引发凝胶形成或光度变化；胰酶等丝氨酸蛋白酶类物质，其作用机制与内毒素触发鲎试剂的过程相似，会模拟内毒素信号导致误判。针对这类干扰，若样品含 1,3-β-D 葡聚糖，可使用试剂盒配套的抗增液，通过抑制 G 因子活性阻断旁路启动；若样品为胰酶等生物制品，可通过加热处理（如 80℃加热 10 分钟）灭活丝氨酸蛋白酶，避免其模拟内毒素反应。这些处理措施能有效排除非特异性信号，确保内毒素检测只针对目标内毒素产生响应，提升结果准确性。

如何准备样品进行内毒素检测呢？测试前，需要根据样品实际情况进行样本前处理。大多数样品只需要稀释，使用内毒素检测试剂盒进行测试即可。如果样品有蛋白酶干扰并导致假阳性结果，建议对样品稀释并70°C加热5-15分钟进行热灭活处理。如需要，可以对灭活样品进行进一步稀释后检测。如果样品可能含有受β-葡聚糖，建议使用抗增液。β-葡聚糖可能来自酵母和纤维素材料。如果样品中因含有内毒素结合物而存在抑制，可以尝试使用分散剂。

内毒素检测方法易受样品基质干扰，法规要求在方法应用前必须进行干扰验证，选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度，作为供试品干扰试验种添加的内毒素浓度计算回收率，若回收率在 50%-200% 范围内，表明无明显干扰；若回收率异常，需通过过滤、中和、透析、加热处理等方式优化样品前处理。方法学确认还需涵盖线性范围（如 0.005-5 EU/mL）、精密度（批内 CV≤15%）、检测限（LOD≤0.01 EU/mL）等指标，确保方法在实际样品检测中稳定可靠，符合《美国药典》 <85>、《中国药典》通则 1143 等药典要求。

湖州申科生物动态显色法鲎试剂用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样本中的细菌内毒素的含量。 细菌内毒素能特异性地活化反应主剂中的 C 因子，活化的 C 因子活化 B 因子，活化的 B 因子进而活化凝固酶原，凝固酶水解反应中的显色底物，产生游离的pNA（对硝基苯胺）从而引起吸光度变化，根据动态检测溶液吸光度变化率对内毒素进行定量。本品能够快速、高灵敏度地定量检测样品中的内毒素水平，适用于各种实验室和工业生产场景，确保产品质量和安全性。

在为新物料或新产品、中间产品建立细菌内毒素检测方法时，常会遇到各种困难，尤其是尚处于新药研发早期阶段的药物。此时，由于药物制剂、缓冲系统等还不稳定，经常会发生变化，这样就给方法的建立带来了不同程度的影响。在建立细菌内毒素检查法之前，须尽可能多地了解有关该药品的基本信息，例如：有关样品的可溶性信息、推荐的稀释液、在水中的溶解度以及合适溶剂，样品的pH范围，分子量大小；如果是蛋白产品，还要了解该产品的等电点，产品规格、体积或重量，拟用于临床的用法和用量等，以便选择合适的样品处理方法和内毒素检测方法。

样品中的脂质体与表面活性剂，会通过不同机制干扰内毒素检测，需结合基质特性选择处理方式。脂质体的干扰体现在两方面：一是脂质双分子层会包裹内毒素，使其无法与鲎试剂接触，导致假阴性；二是脂质体的胶体性质会干扰凝胶形成（凝胶法）或光度信号读取（浊度 / 显色法）。针对完整脂质体制剂，可先用生理盐水稀释降低脂质体浓度，减少包裹作用；若需彻底释放内毒素，还可使用 DMSO、乙醇或甲醇等溶剂裂解脂质体，暴露被包裹的内毒素。表面活性剂的干扰则源于其对物质结构的改变：既可能破坏内毒素的聚集体结构，影响其活性；又可能导致鲎试剂中蛋白质变性，抑制反应。对此，可通过内毒素检查用水或生理盐水稀释样品，降低表面活性剂浓度，消除其对结构的破坏作用。这些针对性处理能有效解决脂质体与表面活性剂的干扰，确保内毒素检测结果真实可靠。