对于大多数哺乳类动物细胞,渗透压在260~320mOsm/kg的范围内都适宜。在生产、配制细胞培养基的过程中,渗透压的测定较为重要,有助于防止在生产、配制过程中出现称量等方面的错误。反应器高密度培养动物细胞过程,在添加碳酸氢钠的过程中注意渗透压的监控,防止渗透压过高对细胞的损害。温度温度对细胞培养基有较大的影响,温度过高可引起营养成份的降解或破坏,细胞培养基的pH、离子强度和电解常数pKa也可能受到影响。如细胞培养液中的谷氨酰胺,在高温条件下降解的速度较快,如35℃贮存时,放置3天降解25%左右,在4℃贮存3周降解约20%。粘滞性及表面张力含血清细胞培养液的粘滞性主要是由血清引起的,在转瓶培养贴壁细胞时,培养液的粘滞性对细胞生长没有多大影响;但在生物反应器悬浮培养细胞时,细胞培养液的粘滞性则直接影响搅拌转速控制及搅拌剪切力对细胞造成的损伤程度。表面张力对细胞培养有较大的作用,尤其在利用生物反应器进行悬浮培养时,搅拌和通气都会引起泡沫的产生。对于含血清培养液,由于血清中多种蛋白的存在,搅拌时产生的气泡较多,气泡的上升运动对细胞的损伤程度还有争议,但气泡的破裂对细胞有明显的损伤作用。为降低这种损伤。F12培养基提供了丰富的营养,支持细胞增殖。RPMI1640培养基包括
1)、初代培养:绣球外植体,将叶片剪去,自来水冲洗干净。在超净工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75%酒精中消毒30s,用无菌水冲洗3~4次。使用白猫漂白水和无菌水按1:4的体积比配制消毒液,将外植体放入消毒液浸泡40min,其中白猫漂白水为上海白猫(集团)有限公司生产的“白猫”牌家用漂白水。消毒完成,将外植体接种到诱导培养基中培养,建立无菌再生系统,诱导培养环境为光照强度1500lx条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养6~8周。其中诱导培养基为ms+~~,诱导培养基的ph值为。(2)、继代培养:以建立的无菌再生系统为对象,将无菌外植体转接到增殖培养基,其中增殖培养基为ms+~~,培养环境为光照强度1500lx条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。每隔8~12周转接入新的增殖培养基,增殖培养基的ph值为。(3)、生根培养:经过继代培养的绣球组培苗,取2~3cm的顶芽,放入生根培养基,其中生根培养基为1/2ms+~~,生根培养基的ph值为。诱导培养环境为光照强度1500lx条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。。湖南无血清培养基包括F12培养基在细胞生物学研究中广泛应用,适用于多种细胞系。
MEM低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统,该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。细胞培养过程中pH值下降产生的原因有很多。在细胞生长非常快时,pH值通常下降得很快,此时可以通过及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外,培养瓶盖拧得过紧、NaHCO3缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、**、酵母或***污染等也能导致pH值通常下降得很快。这时,可以通过以下几种方法解决:1)增加培养液中NaHCO3浓度或减少培养箱内CO2浓度。NaHCO3含量在;2)改用不依赖CO2培养液;3)适当松开瓶盖。在培养液中加HEPES缓冲液,使终浓度为10~25mM;4)在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks’盐配制的培养液;5)如果是污染造成的则丢弃培养物或用*****。酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下,可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值,但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同,不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值,建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响,也可通过纯化技术去除。
培养实例2和对比培养例2的培养结果比较:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养28d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,在平均株高、莲座叶大小、根长、花朵数量等方面均优于1/2ms生长培养基;并且,采用上述培养方法,不论是1/2cs生长培养基还是1/2ms生长培养基,均能获得形态完整的花粉,且花粉活力高达%,其特点在于选择了兰兹贝格型拟南芥作为培养对象,且选择了高度适中的培养盒进行培养,克服了传统培养方法无法获得拟南芥整个生育期无菌苗的缺点,所获无菌花***可直接用于花*离体培养等研究内容。如图2所示。培养实例3:油菜无菌苗培养与培养实例1不同的地方在于:步骤(1)所用种子为中双11号油菜种子,其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为:中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养9d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,叶色浓绿,茎秆粗壮、平均茎中粗为,根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。对比培养例3:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例3,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。使用减血清培养基减少了实验中血清带来的变异性。
NalgenePET/PETG方形培养基瓶NalgeneSquarePET和PETG培养基瓶是当今制*,诊断和生物技术市场中理想的培养基、血清、缓冲液、试剂储存和运输容器。这些耐用、轻质且防碎的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)和厚壁抗破裂乙二醇改性(PETG)瓶兼容高密度聚乙烯(HDPE)密封盖,具有三种兼容的密封盖类型;标准螺纹密封盖,防盗密封盖和带隔膜的密封盖。独特的Nalgene瓶和密封盖设计无需衬垫或垫圈即可提供可可靠的防漏性能,并提供有效的氧气和二氧化碳屏障,以维持试剂的适当pH值。这些包装瓶可以从科研扩展到生产,同时提供实验室使用的包装瓶,以及手动和自动化灌装线。Nalgene培养基瓶的设计和制造符合我们保证安全和防漏的严格要求,原始树脂具有DMF编号,且符合以下法规规范:USPClassVI,USP,和ISO10993-3。产品无细胞毒性,无热原,无致突变性,采用动物源性成分(ADCF)‡材料制成,有助于确保成分纯度。对于适用于特定Nalgene瓶的监管要求和认证,请联系Nalgene法规支持部门。化学品会影响塑料的强度、柔韧性、表面外观、颜色、尺寸或重量,因此您应仔细选择适合您特定用途的材料。通常,与PETG相比,PET树脂对稀酸、脂肪醇、脂肪烃和干盐的耐受性更强。无血清培养基提供了无血清的纯净环境。黑龙江RPMI1640培养基哪个好
F12培养基在细胞分化研究中表现优越。RPMI1640培养基包括
才能满足新细胞合成、细胞代谢等生化反应所需要的物质和能量。细胞培养基的主要成份是水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助营养物质等。此外,还可能含有血清、血清替代成分、pH指示剂等。水是细胞的主要成份,也是细胞赖以生存的主要环境。细胞培养液中90%以上的成份是水。细胞对水的品质非常敏感,水的品质将直接影响细胞培养的效果。而水中通常含有重金属、氯、磷、有机物、热原等污染物,细胞培养用水须经过纯化,品质应符合***典注射用水标准或者超纯水的标准。能源和碳源是用于维持细胞生命和支持细胞生长,主要包括糖、糖酵解的产物和谷氨酰胺,其他氨基酸是次要的能源和碳源物质。细胞能够利用的糖类主要是六碳糖,目前大多体外培养时选取葡萄糖作为细胞的主要碳源和能量来源,因此细胞培养基中基本都含有葡萄糖,含量一般为5~25mmol/L。在葡萄糖浓度较高时,细胞主要通过扩散作用吸收葡萄糖,细胞膜内外的葡萄糖浓度梯度是细胞吸收葡萄糖的动力;在葡萄糖浓度较低时,主要由钠离子推动的高亲和性转运过程使细胞摄取葡萄糖。葡萄糖进入细胞后参与糖酵解、核酸代谢、糖原合成、能量代谢以及一些氨基酸的合成。与体内的能量供应途径不同。RPMI1640培养基包括