已发现当培养基中的血清浓度减少时,这些成分都是必需的。既使在使用血清的情况下,这些成分也可帮助细胞的克隆化培养及维持某些特殊细胞系的生长。***和生长因子在大多数常规培养基的配方中都没有注明,但在无血清培养基中通常要加入它们,用其来代替血清中的***能增加多种不同类型细胞的贴瓶率;生长因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF-1和IGF-2及白介素等,生长因子和细胞因子有着***的特异性,一般与***或其它物质起相互协同或加成作用。另一种常见的添加物就是血清替代物,目前已有许多可完全或部分替代传统培养液中血清成分的商业产品,其稳定性较好,但批次间仍有差别,产品的成分也不很确定。干粉培养基原倍液的配制1)配制过滤**的细胞培养基(1)阅读培养基使用说明,确定需要添加何种添加剂(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、**酸钠、HEPES等)。(2)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。(3)加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。(4)轻微搅拌溶解,加注射用水至规定体积。(5)用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。(6)用μm滤膜正压过滤**。。无酚红培养基确保了细胞实验结果的准确性。内蒙古MEM a培养基进口
维持15-20分钟,可杀灭所有的繁殖体和芽胞。本法适用于耐高温、耐湿物品的**,如普通培养基、生理盐水、手术敷料等。(二)下向主要介绍高压蒸气**器**效果的验证方法高压蒸气**器使物品**后达到无菌要求,这是**实验中的基本保证。高压**器**效果是否合格足实验成败的**基础**关键的首要步骤。除少数培养基只需加热溶解,不需高压**外,大部分培养基均需121℃高压**15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基**不彻底,直接关系到对**的无菌试验结果。因此必须认真对高压**器进行**效果的验证。为此我们提供了进行**效果验证的一个简易可行的方法。1.试验材料(1)嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌,含芽胞量5-lO5CFU/片。(2)121℃压力蒸气**化学指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培养基116℃高压**20分钟后备用。(4)O—150℃留点温度计。2.方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片(以下简称菌片)用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压**器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如**器为二层,则需放10处。北京无血清培养基采购F12培养基在细胞生物学研究中广泛应用,适用于多种细胞系。
生产上一般采用冷水喷淋冷却,冷却到40-50℃后,输送到预先已经**过的罐内。(四)、间歇**与连续**的比较1、歇**的***和缺点***是设备要求低,不需另外设置加热、冷却装置;操作要求低,适于手动操作,适合于小批量生产规模;适合于含有大量固体物质的培养基的**。缺点是培养基的营养物质损失较多,**后培养基的质量下降;需进行反复的加热和冷却,能耗较高;不适合于大规模生产过程的**;发酵罐的利用率较低。2、连续**的***和缺点***是**温度高,可减少培养基中营养物质的损失;操作条件恒定,**质量稳定;易于实现管道化和自控操作;避免了复的加热和冷却,提高了热的利用率;发酵设备利用率高。缺点是对设备的要求高,需另外设置加热、冷却装置;操作较麻烦;染菌的机会较多;不适合于含大量固体物料的**;对蒸汽的要求高。由此可见,无论在理论上或者在实践上,与间歇**过程相比,连续**的***十分明显。因此,连续**越来越多地被用培养基的**。
三)、试验结果:初代培养:使用本发明的消毒方法,消毒成功率能达到80%,诱导培养基萌芽率能达到90%,可以成功建立无菌再生体系。继代培养:使用本发明的增殖培养基,绣球组培苗增殖倍率能够达到8~10倍,组培苗高度一致,生长健壮。生根培养:使用本发明的生根培养基,绣球组培苗生根率能够达到95%,根系发达,健壮,可以成功用于移栽大棚。本发明所指ms培养基是murashige和skoog研制的培养基,其成分配方表见表1。1/2ms培养基是指大量元素含量为ms培养基的一半,其他成分用量相同。表1、ms培养基成分表本发明涉及的植物生长调节剂有:6-ba—6-苄氨基嘌呤;ga3—赤霉素;iba—吲哚丁酸,naa—萘乙酸。本发明中的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基均为液体培养基。本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例,并非依此限制本发明的保护范围,故:凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化,均应涵盖于本发明的保护范围之内。F12培养基适用于复杂细胞培养实验。
**早开发的基础培养基(minimalessentialmedium,MEM),其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍,其特性及应用的范围见表1-2。表1-2常用合成培养基的特性及应用的范围培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后,可***用于多种细胞培养,并用于**学、*苗生产等。MEM细胞培养基MEM(MinimalEssentialMedium)培养基有含Earle's平衡盐的类型,也有含Hanks'平衡盐的类型;有高压**型的,也有过滤**型的;还有含非必需氨基酸的类型。是**基本、适用范围**广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿*细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交*的骨髓*细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基础上改良,增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交*细胞培养。使用减血清培养基能减少实验的变异性。上海Ham's F12培养基供应商家
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cs液体培养基和1/2cs液体培养基在用不同ph超纯水(ph为)配制时的ph都较为稳定,在未调ph的情况下,可直接用于多种植物培养。如图8所示。(2)以克新18号马铃薯无菌苗为例,观察在未调ph和将ph调至:a、培养基制作方法:随机选取超纯水,测得其ph为,用于配制8种不同的液体培养基。第一种:1/2ms未调ph液体培养基,其为取1/2ms基本培养基置于ph为;第二种:1/2cs未调ph液体培养基,其为取1/2cs基本培养基置于ph为;第三种:ms未调ph液体培养基,其为取ms基本培养基置于ph为;第四种:cs未调ph液体培养基,其为取cs基本培养基置于ph为;第五种:1/,其为取1/2ms基本培养基置于ph为,调ph至;第六种:1/,其为取1/2cs基本培养基置于ph为,调ph至;第七种:,其为取ms基本培养基置于ph为,调ph至;第八种:,其为取cs基本培养基置于ph为,调ph至。b、培养方法:从培养实例4所述培养基获得长势**的马铃薯幼苗,在清水中缓苗2-3d后选取长势一致的马铃薯幼苗,如图9-a所示,置于上述8种不同液体培养基8d,每隔2d更新1次液体培养基;于温度22-23℃、湿度50-70%、光照强度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照时间14h、黑暗时间10h)条件下培养。内蒙古MEM a培养基进口