微量元素在细胞内通常以与有机物结合的形式存在。其中铁在细胞中参与氧的转运;钴是维生素B12的组成部分,参与叶酸的合成和脂肪酸的合成;镍能够***脱氧核糖核酸酶、乙酰辅酶A合成酶等在细胞内具有重要功能的酶,还具有稳定核酸结构的功能;亚硒酸钠中的硒,作为谷胱甘肽过氧化物酶的辅基,具有抗过氧化物能力,参与消除细胞内的脂肪酸过氧化物,提高细胞的生长速率和活性。在低血清、无血清细胞培养基中,为满足细胞生长增殖需要,常常添加一些成份:蛋白质、多肽、核苷、嘌呤、柠檬酸循环的中间产物、脂类、及一些血清替代因子等。其中蛋白质具有重要的作用,动物细胞对许多物质(难溶于水的离子或脂类物质)的摄取需要借助蛋白质的传递作用,如白蛋白、传递蛋白、贴壁蛋白等能够携带脂肪酸、***、矿物质等促进细胞生长。转铁蛋白是一种重要的传递蛋白,能够结合铁,促进细胞对铁离子的吸收,并具有***作用,其促生长作用可能与其具有生长因子的功能有关。胰岛素可促进细胞对葡萄糖和氨基酸的利用,商业化中一些生长因子以重组蛋白形式添加到培养基中,主要用来刺激细胞增殖,并可促进糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一种重要的刺激细胞生长的化合物,是脑磷酸的合成前提。无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验设置。四川MEM a培养基价格查询
将未发生霉变的带有胚的一半种子用于愈伤**诱导实验;b、**消毒:于无菌环境下,将挑选的种子置于无菌三角瓶中,用无菌水清洗3-5次,75%酒精摇动清洗5min,无菌水清洗3-5次,5%naclo浸泡30min(期间每隔5-10min摇动30s),清水洗3-5次,种子表面的无菌水可用干燥的无菌滤纸吸去。(2)配制诱导培养基:cs基本培养基+,用超纯水溶解,。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。(3)愈伤**的诱导方法:用弯头镊子将无菌种子的缺口一端倾斜插入cs水稻成熟胚愈伤**诱导培养基,胚贴于培养基表面;于温度24-26℃、湿度50-70%、光照强度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照时间16h、黑暗时间8h)条件下培养。(4)cs诱导培养基的诱导结果为:水稻成熟胚愈伤**诱导时,经cs诱导培养基诱导培养12-14d产生大量淡黄色结构致密的团状愈伤**,出愈率为100%。如图7所示。对比培养例7:将cs基本培养基替换为ms基本培养基,其余完全同培养实例7,ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为:水稻成熟胚愈伤**诱导时,经ms诱导培养基诱导培养12-14d产生大量淡黄色结构致密的团状愈伤**,出愈率为100%。如图7所示。四川MEM a培养基价格查询DMEM培养基适用于多种哺乳动物细胞的体外培养和实验研究。
平衡盐溶液(balancedsaltsolution,BSS)简称盐溶液,集缓冲液的缓冲能力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体,兼具维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度、同时供给细胞生存所必需的能量和无机离子成分的作用。各种BSS的缓冲系统有所不同,其中以Hank’s液和Earle’s液为例,它们主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的pH值。Eagles液在空气水平的CO2中,溶液会变碱,Hank’s液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存**,需要用Earle’s液,。如果**是清洗将要在细胞培养基中储存的**,用Hank’s液就可以了。表3-1几种常用的平衡盐溶液配方(g/L)一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成分,同时参与许多重要的细胞功能活动。但它们有使细胞凝集的作用,在配制分散细胞的消化液和特殊用途的细胞洗涤时,宜采用Ca2+、Mg2+含量较低的Dulbecco液或无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液,或者PBS液。概述基础细胞培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
这些重组蛋白和动物来源成分对生物制品的安全性有很大影响。成本低。主要用途应用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM(SLM)低血清培养基分别培养Vero细胞、BHK21细胞和CHO细胞,新生牛血清用量可以从10%降至3%,减少新生牛血清使用批次和批间差的影响,减少生物制品纯化损失,减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险,提高制品安全性。低血清培养基可以在方瓶、3L转瓶、15L转瓶及生物反应器中培养细胞,在*苗生产中可以达到低血清高密度的培养效果。低血清培养基营养成分优于基础培养基,易使细胞增殖迅速,代谢旺盛,代谢产物对细胞有不良影响,易产生细胞老化脱落现象。因此需要适当增加换液次数,增加传代频率。获取同样的细胞量,用低血清培养基将比用传统培养基缩短近1/3的时间,可提高生产效率。采用199(SLM)低血清培养基培养Vero细胞分泌狂犬*苗病毒,滴度明显高于采用199培养基传统培养获得的滴度。采MEM(SLM)低血清培养基BHK21细胞,在本实验情况下12代内细胞形态和致密度均优于MEM培养基传统培养情况,因而可以预期其产生的口蹄*、甲肝等*苗生产的病毒产量将提高。低血清培养基用于反应器Vero细胞狂犬*苗的生产,实践证明效果良好。采DMEM。MEM培养基常用于多种哺乳动物细胞的体外培养。
nh4)2so4264mg、nh4h2po4288mg、mgso4·7h2o370mg、cacl2332mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、烟酸2mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。将本实施例中的广适性植物**培养基命名为cs基本培养基。实施例二,本实施例广适性植物**1/2培养基,其每1000ml培养基中含有:kno31331mg、(nh4)2so4132mg、nh4h2po4144mg、mgso4·7h2o185mg、cacl2166mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、烟酸2mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。将本实施例中的广适性植物**1/2培养基命名为1/2cs基本培养基。上述实施例中的cs基本培养基、1/2cs基本培养基与现有ms基本培养基及1/2ms基本培养基的成分对比如表1所示:表1ms、cs、1/2ms、1/2cs基本培养基成分表上述实施例中的cs基本培养基和1/2cs基本培养基,若应用于植物**培养中的固体培养基制作,可根据实际需要添加包含但不限于适量***、蔗糖、葡萄糖、白糖、琼脂、植物凝胶、卡拉胶、大量元素水溶肥等,添加量同ms培养基一致,调节ph至,121℃15min灭菌后摇匀分装。F12培养基常用于神经细胞和其他敏感细胞系。福建F12培养基牌子
MEM培养基含有必要的氨基酸和维生素。四川MEM a培养基价格查询
已发现当培养基中的血清浓度减少时,这些成分都是必需的。既使在使用血清的情况下,这些成分也可帮助细胞的克隆化培养及维持某些特殊细胞系的生长。***和生长因子在大多数常规培养基的配方中都没有注明,但在无血清培养基中通常要加入它们,用其来代替血清中的***能增加多种不同类型细胞的贴瓶率;生长因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF-1和IGF-2及白介素等,生长因子和细胞因子有着***的特异性,一般与***或其它物质起相互协同或加成作用。另一种常见的添加物就是血清替代物,目前已有许多可完全或部分替代传统培养液中血清成分的商业产品,其稳定性较好,但批次间仍有差别,产品的成分也不很确定。干粉培养基原倍液的配制1)配制过滤**的细胞培养基(1)阅读培养基使用说明,确定需要添加何种添加剂(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、**酸钠、HEPES等)。(2)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。(3)加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。(4)轻微搅拌溶解,加注射用水至规定体积。(5)用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。(6)用μm滤膜正压过滤**。。四川MEM a培养基价格查询