上海F12培养基技术指导

    发酵培养基为：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，cecl30-40mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；发酵工艺同实施例1，100l发酵罐中含有70l发酵培养基。设置cecl3的添加浓度为0，，如图1-2所示，随着cecl3添加量的增加，菌体浓度和谷氨酸含量均有所提升，当添加量为10mg/l时，菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值，然后出现下降趋势，但是整个过程中，糖酸转化率没有明显改变（附图未显示）；说明cecl3稀土盐能够促进菌株增殖，提高谷氨酸相关合成酶的活力，提高谷氨酸的产量，但是过高的浓度会造成菌株增殖放缓和死亡，谷氨酸产量相应下降。二、通过上述实验确定cecl3添加量为10mg/l，在此基础上，研究2-羟基乙胺对菌体浓度、谷氨酸含量以及糖酸转化率的影响。设置2-羟基乙胺的浓度为，5,10,20,40,80,160mg/l，如图3-4所示，随着2-羟基乙胺添加量的增加，菌体浓度随之增加，相应地，谷氨酸含量和糖酸转化率也有所提升，当添加量为40mg/l时，菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值，继续增加2-羟基乙胺的浓度，产生明显的抑菌效果，菌株密度下降明显；原因是，低浓度的2-羟基乙胺可能促进磷脂酰乙醇胺细胞壁组分的合成。RPMI1640培养基含有多种关键营养成分，支持细胞生长。上海F12培养基技术指导

    平衡盐溶液（balancedsaltsolution，BSS）简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体，兼具维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度、同时供给细胞生存所必需的能量和无机离子成分的作用。各种BSS的缓冲系统有所不同，其中以Hank’s液和Earle’s液为例，它们主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的pH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hank’s液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存**，需要用Earle’s液，。如果**是清洗将要在细胞培养基中储存的**，用Hank’s液就可以了。表3-1几种常用的平衡盐溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成分，同时参与许多重要的细胞功能活动。但它们有使细胞凝集的作用，在配制分散细胞的消化液和特殊用途的细胞洗涤时，宜采用Ca2+、Mg2+含量较低的Dulbecco液或无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液，或者PBS液。概述基础细胞培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。北京无血清培养基代理商F12培养基在细胞分化和基因表达研究中有重要应用。

    将蒸过的原料置于室温下过夜，未被杀死的孢子便发芽生长，芽孢发育成营养细胞，再30min便可杀死。如此连续反复进行2-3次，亦可达到彻底**的目的。3、分批**的操作分批灭歇是在所用的发酵罐或其他培养装置中进行的，它是在配制罐中配好培养基后，通过**管道输入发酵罐等培养设备中，然后开始**。在进行培养基的间歇**之前，通常先将发酵罐等培养装置的分空气过滤器进行**，并且用空气将分过滤器吹干。开始**时，应先放去夹套或蛇管中的冷水，开启排气管阀，通过空气管向发酵罐内的培养基通入蒸汽进行加热，同时，也可在夹套内通蒸汽进行间接加热。当培养基温度升到70℃左右时，从取样管和放料管向罐内通入蒸汽进一步加热，当温度升至120℃，罐压为1*105Pa（表压）时，打开接种、补料、消泡剂、酸、碱等管道阀门进行排汽，当然在保温过程中，应注意凡在培养基液面下的各种进口管道都应通入蒸汽，而在液面以上的其余各管道则应排放蒸汽，这样才能不留死角，从而保证**彻底。保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。

    所以做过强检的**器还必须进行**效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提**器，往往仪器指针达到所需的温度，但**物品的实际温度却未达到要求。导致**物品不彻底，影响实验结果。培养基**不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气**器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。（三）**时的注意事项使用高压蒸气**器时，首先应注意在开放蒸气的同时，排除**器内的冷空气。必须将器内冷空气全部排除后，才可关闭排气孔。假如**器内仍存留有部分空气时，刚压力表上虽已达到了某一压力值，但器内之温度仍未达到相应之度数。存留的空气越多，刚二者相差也越大。差也越大，器内温度不足，**则不彻底。表蒸汽压力与温度的关系蒸汽压力（kPa）密度（kg/cm2）温度（℃）1126表高压蒸汽**器中温度与冷空气排出量的关系蒸汽压力（kPa）所达温度。MEM培养基含有多种必需的营养成分和矿物质。

    这些重组蛋白和动物来源成分对生物制品的安全性有很大影响。成本低。主要用途应用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培养基分别培养Vero细胞、BHK21细胞和CHO细胞，新生牛血清用量可以从10％降至3％，减少新生牛血清使用批次和批间差的影响，减少生物制品纯化损失，减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险，提高制品安全性。低血清培养基可以在方瓶、3L转瓶、15L转瓶及生物反应器中培养细胞，在*苗生产中可以达到低血清高密度的培养效果。低血清培养基营养成分优于基础培养基，易使细胞增殖迅速，代谢旺盛，代谢产物对细胞有不良影响，易产生细胞老化脱落现象。因此需要适当增加换液次数，增加传代频率。获取同样的细胞量，用低血清培养基将比用传统培养基缩短近1/3的时间，可提高生产效率。采用199(SLM)低血清培养基培养Vero细胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明显高于采用199培养基传统培养获得的滴度。采MEM(SLM)低血清培养基BHK21细胞，在本实验情况下12代内细胞形态和致密度均优于MEM培养基传统培养情况，因而可以预期其产生的口蹄*、甲肝等*苗生产的病毒产量将提高。低血清培养基用于反应器Vero细胞狂犬*苗的生产，实践证明效果良好。采DMEM。DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。云南Ham's F12培养基是什么

减血清培养基提高了细胞实验的可靠性和重复性。上海F12培养基技术指导

    SLM）低血清培养基添加1％小牛血清在转瓶中培养CHO细胞生产EOP，可提高收液次数，每次收液表达量明显提高。概述无血清培养基是用来在无血清条件下生长特殊类型的细胞或进行专门应用的培养基。一般是由基础培养基和替代血清的补充因子组成。无血清培养基中没有添加血清，但含有个别蛋白或大量蛋白组分。无血清培养基与无蛋白培养基的区别在于培养基中没有添加蛋白，但含有一些动物或植物来源成分，如低分子量肽的水解物。还有一种化学限定培养基，培养基中不含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有成分均有已知的化学结构。***：1）未知组分少；2）培养基中不存在血清中的抗体、补体等成分，对培养细胞影响小；3）杂蛋白含量少，生产的产品后期处理较容易，例如*苗生产由于人用*苗需要纯化减少杂蛋白，纯化过程中成本消耗很大，*苗的损失也很大；4）无血清培养既可以实现细胞的大规模悬浮培养，增加培养液的利用率，可以采用发酵罐培养减少了人力消耗。缺点：目前为止不是所有的细胞都能在无血清培养基中培养。无血清培养基的某些组分价格昂贵，导致无血清无法工业推广的主要原因。上海F12培养基技术指导