外泌体蛋白质特征是:膜结合四跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81和CD82),以及常规用于分离的EpCAM和Rab5。其他公认的蛋白质是受体(CD46和CD55)、热休克蛋白(HSP;Hsc70、Hsp70和Hsp90)、参与外泌体形成的蛋白质(Alix、TSG101)和负责融合和转运的膜蛋白(GTP酶、膜联蛋白和flotillin;ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法检测这些标记蛋白可以用于确认外泌体的存在。也有相关研究称外泌体含有其他颗粒,如胆固醇(B淋巴细胞来源)、鞘脂、磷酸甘油酯和神经酰胺等。外泌体还运输形态发生素(Hedgehog、Wingless和Wingless-like),参与黑腹果蝇所描述的组织模式发育。外泌体的转移涉及细胞因子、基质降解酶和细胞外基质重塑等多种调节步骤。广州血液RNA外泌体分离企业
外泌体的表征方法:根据药物递送系统(DDS)表征外泌体结构至关重要,因为它决定了DDS的特性,例如细胞或组织亲和力、应激反应、吸收途径和药物释放。2014年和2018年国际细胞外囊泡学会(MISEV2018)提出了外泌体(包括研究和外泌体制备)应满足的基本要求指南。在开发基于外泌体的DDS时,必须考虑数量、大小、形态、膜组成和蛋白质(包括受体)等参数。这些参数表征所用的技术主要为光学、非光学和微流体技术。外泌体的表征方法之非光学方法:FTIR光谱和衰减全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌体质量量化和脂质和蛋白质含量的总体估计。使用TRPS,可以同时测量大小、浓度和zeta电位。由于扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜的成本较高,近些年来,一种新型的纳米粒度分析仪器在外泌体研究领域迅速发展,比如:粒度分析仪可以不只可以进行单颗粒检测,颗粒粒径检测还可以检测细胞外泌体的浓度、zeta电位、形态等进行多维度检测。广州血液RNA外泌体分离企业外泌体在心血管系统中扮演着重要的调节作用,与各种疾病如心肌梗死、心衰等相关联。
生物试剂Tetraspanins是常见的外泌体标志物。它们包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins参与外泌体的产生。在抗原呈递细胞中,MHC-II分子的功能通过它们整合到富含四跨膜蛋白CD9的细胞质膜区域中来调节。CD63外泌体蛋白被认为是病症的蛋白质标志物。此外,四跨膜蛋白家族的另一成员CD81在丙型肝炎的细胞进入中起重要作用。慢型丙型肝炎患者血清中的外泌体CD81会升高,表明CD81可能是丙型肝炎染上的标志物。胶质母细胞瘤表皮生长因子受体vIII(EGFRvIII)被认为是胶质母细胞瘤的标志物。关于中枢的神经系统,在脑疙瘩者血清中分离的外泌体中也检测到了EGFR、EGFRvIII和TGFβ。
外泌体的提取主要包括以下几种方式:一是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。二是微流控分离法,该方法通过负压及震荡等机械原理分离外泌体,产量纯度均具有较大幅度提高,但需要特定设备配合。外泌体分离方法之纳米粒径分析法:确定性横向位移依赖于颗粒流动路径的变化,而颗粒流动路径取决于颗粒尺寸。这种方法虽然比较简单,但是需要使用扫描电镜技术、动态光散射技术、纳米粒子跟踪分析技术、单粒子干涉反射成像传感器(SP-IRIS)技术等。对于外泌体大小、形态、外泌体的浓度、zeta电位等分析也可以使用粒度分析仪。外泌体的组成成分包括脂肪、糖、蛋白质等,对其组成成分的分析有助于了解其生物学功能和生理调节作用。
什么是外泌体?外泌体的作用。简单来说,它就是我们皮肤肌底细胞的分泌物,但是这个分泌物是除了细胞核外,把其他所有的营养物质都能涵盖,所以它是取之于人类细胞用之于人类细胞,成分安全。外泌体不是干细胞,是干细胞较精华的部分,生物**为了获取外泌体囊泡,将脐带间充质干细胞进行分离、纯化、培养、增殖等一系列复杂先进工艺制备而成的外泌体混悬液,他是干细胞得以存活的精华,细胞是靠它生长的,**对干细胞的获取很容易的,但外泌体就比较难了,全球医学**都在为研究外泌体的医学应用而付出努力,目前只有少数国家的细胞库能够成功获取这一成果,其含有许多信号蛋白,核糖核酸,细胞生命DNA的密码,一个细胞里95%是水,还有5%就是外泌体成分,其复杂特殊性比干细胞的培养时间长四五倍,精贵了一百倍他是干细胞的精华部分,保证了“干细胞”的所有功能并且具备干细胞未具备的功能———它能准时抵达指定位置及时准确治着替代衰老病变细胞。现有的外泌体分离方法可能存在样品丢失和样品污染的问题。济南脑脊液外泌体公司
外泌体可通过血液或其他体液传播,从而在远离原发灶的部位诱导细胞生长和转移。广州血液RNA外泌体分离企业
外泌体分离方法之尺寸排阻层析法:尺寸排阻层析法也被称为凝胶过滤层析法,这种方法是基于凝胶孔的大小和外泌体的大小,大于凝胶孔径的颗粒被洗脱;反之,小于凝胶孔径的颗粒将被抑制。凝胶过滤层析分离法总体上能获得较高的纯度和产量。建议与超滤相结合,这种方法可提供更少的蛋白质污染和更高的外泌体回收率。凝胶过滤层析分离法的缺点是凝胶的成本过高。外泌体分离方法之声学流体分离:声学流体分离技术利用声场根据粒子的大小、密度和可压缩性来分离粒子。生物样品在此过程中不会受到损坏,并且分离的本身是非接触式、高效的和无标记的。广州血液RNA外泌体分离企业
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