qPCR仪基本参数
  • 品牌
  • 酷博、
  • 型号
  • q225
  • 类型
  • 荧光定量pcr仪
qPCR仪企业商机

TaqMan试剂:一开始,使用的是嵌入式染料进行的实时荧光PCR (qPCR) 产物定量。但是这些染料存在了重大缺点,即使会同时去检测特异性以及非特异性PCR产物的扩增量。TaqMan方法的开发通过去引入基于Taq DNA聚合酶5’核酸酶活性的荧光标记探针,实时定量PCR系统得到了的提升。这些荧光探针的使用,使得实时定量的方法得到了发展,实现了对特定扩增产物的检测。此外,荧光标记探针的开发,也免去了用于探针降解分析的PCR反应后处理的过程。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确,重现性比较好的定量方法,已得到全世界的公认。珠三角Quantagene q225mxqPCR仪

PCR 反应中通过控制温度变化使得核酸分子重复地解链与延伸,从而实现对目的片段的指数扩增。因此,准确的温度控制与快速的变温系统是实现高效的 qPCR 实验的基础与关键。加热块各处温度越一致,则因位置差异。而带来的样品之间的扩增效率差异越小。q225 系列荧光定量 PCR 仪突破性地采用了复合式液体冷却循环系统,极大的消除了单一风冷散热器所带来的温度均一性差、降温速率慢、仪器噪音大等缺陷,可将96 孔间温度差控制在±0.15°C 以内,确保每一孔内的实验均严格按照您所设置的控温程序进行。qPCR 反应所需时间很大程度上取决于对反应溶液进行变温所需要的时间,而这一过程又受到加热块升降温速度和液体升降温速度两方面的影响。q225 所使用的热循环系统峰值变温速率可达4°C/s,更重要的是,经过精密设计的加热块能够很大程度地贴合孔板形状,实现高效的热传导,使得在加热块达到预定温度后反应溶液也能在短时间内达到相同温度,反应溶液温度更为均一。q225 出色的热循环系统设计使得40 个循环的常规 qPCR 可以在短短43 分钟内轻松完成,让您的工作效率获得质的提升 。湛江厂家qPCR仪价格准确的温度控制与快速的变温系统是实现高效的 qPCR 实验的基础与关键。

免疫沉淀——捕获并分离蛋白质-DNA复合物使用抗体捕获蛋白质-DNA复合物中的目标蛋白质是实验成功的关键因素。抗体免疫沉淀并从细胞核组分中分离蛋白质,去除不相关的细胞物质。使用抗体结合磁珠完成所得抗体-蛋白质-DNA复合物的纯化。经过孵育后,充分洗涤磁珠-抗体-蛋白质-DNA复合物,纯化并洗脱蛋白质-DNA复合物。制备DNA——解交联和DNA纯化:现在含有目标蛋白质的染色质片段已分离,需要解交联并纯化DNA。解交联通常采用高热孵育和/或消化来完成。注意:此时可以停止ChIP。经过解交联和/或DNA纯化后,可以将样品于-20°C储存。

qPCR中的荧光探针是一种短链寡核苷酸,带有荧光基团和淬灭基团,它可以特异结合目的产物的DNA序列。其检测原理是荧光共振能量转移(FRET),即荧光基团和淬灭基团在目标DNA分子扩增过程中因为聚合酶的外切活性从而水解分离使荧光信号的释放;随着扩增过程的推进,机器实时检测增强的荧光信号,从而产生终的荧光扩增曲线。根据修饰基团标记和能量转移方式,可以将探针分为TaqMan探针、分子信标和其他探针。TaqMan探针(荧光淬灭水解探针)现今常用的TaqMan探针主要是水解探针,其多是5’端标记荧光基团,3’端标记淬灭基团的短单链寡聚核苷酸。在qPCR反应中,基于TaqDNA聚合酶的5’-3’核酸外切酶活性,对TaqMan探针进行切割,使荧光基团和猝灭基团分离,荧光基团发出的荧光信号不会被淬灭,释放的荧光信号被机器接收。TaqMan探针的qPCR相比于染料法多了一条TaqMan探针,可以特异性结合DNA序列,因而具有更好的特异性,但探针合成价格偏高。SYBR Green I 是高灵敏度的非特异性双链DNA荧光染料,具有绿色激发波长。

与标准 PCR 一样,SYBR Green 方案由变性、退火和延伸阶段组成。 不同之处在于,您在 qPCR 设置期间将一些双链 DNA 结合染料 SYBR Green I 添加到预混液中。 这种荧光染料在延伸阶段嵌入到双链 DNA 序列中,显示出荧光信号的强烈增加。 在每个热循环结束时测量此信号将使您能够确定存在的双链 DNA 的数量。SYBR Green 检测的缺点是染料会与任何双链 DNA 序列结合。 这意味着您还可以检测非特异性 qPCR 产物(例如引物二聚体)发出的荧光。 为消除这种风险,通过执行熔解曲线分析检查反应特异性,或使用 TaqMan 方法。qPCR扩增效率100%的理想条件下的PCR反应,PCR产物量呈指数倍增长Yn=Y0×2^n。珠三角节省qPCR仪价格

q225 加样孔板侧壁和金属热块能够严密贴合,使液体样品迅速达到设定温度,从而减少实验时间。珠三角Quantagene q225mxqPCR仪

制备DNA——解交联和DNA纯化现在含有目标蛋白质的染色质片段已分离,需要解交联并纯化DNA。解交联通常采用高热孵育和/或消化来完成。注意:此时可以停止ChIP。经过解交联和/或DNA纯化后,可以将样品于-20°C储存。定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。ChIP的qPCR如何定量分析ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。两种常用的标准化 ChIP-qPCR 数据方法——Percent Input法和富集倍数法(Fold Enrichmen)。与input相关的ChIP-qPCR数据包括ChIP的背景水平和input染色质的标准化。建议ChIP 实验重复,尽可能将结果与背景信号和标准误差一起显示。珠三角Quantagene q225mxqPCR仪

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