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外泌体提取，PEG-base沉淀法，聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。通过差速超速离心法（Differential Ultracentrifugation）从细胞培养基上清或血浆血清中提取外泌体。外泌体检测-南京英瀚斯-第三方检测机构。福建推荐的外泌体粒径分析

外泌体提取之后利用电镜来分析其大小和形态，利用流式细胞仪来分析细胞表面标记，通过Western blot和ELISA等方法对蛋白进行分析，或通过qPCR和新一代测序（NGS）来分析RNA。调查发现，在分离exosome时，约有56%的人采用超速离心法，说明这种方法仍是目前的金标准方法。不过这种方法缺点也不少：耗时耗力，往往需要8-30个小时；每次比较多只能处理6个样品；需要大量的起始材料；产量不高。商业化的exosome提取试剂盒已经上市，更为简单省事。新疆专门做外泌体电镜外泌体检测服务，公司自有实验室，欢迎考察。

外泌存在于人类的生殖，妊娠和胚胎发育需要精细/动态的细胞间通信。**、羊水、血液和母乳都含有具有假定功能的外泌体。精浆外泌体与精子成熟有关。分子谱显示，microRNAslet-7a,let-7b,miR-148a,miR-375和miR-99a富集于来自多个人类捐赠者的精浆来源外泌体中，这些miRNA与白细胞介素(IL-10和IL-13)的表达有关，提高了外泌体在生殖道常驻免疫中发挥作用的可能性。精浆来源的外泌体也能抑制HIV-1***，可能是通过阻断HIV早期蛋白转录***剂(Tat)的招募和HIV-1的后续转录。

外泌体的产生过程为：细胞膜内陷，形成内体（endosome），再形成多泡体（multivesicularbodies，MVB），比较后分泌到胞外成为外泌体。外泌体中携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。外泌体比较早见于1981年，EGTrams等在体外培养的绵羊红细胞上清液中发现了有膜结构的小囊泡，并命名为exosome。对于外泌体的作用，当时推测为细胞排泄废物的一种方式。1996年GRaposo等发现类似于B淋巴细胞的免疫细胞也会分泌抗原呈递外泌体（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌体可以直接刺激效应CD4+细胞的抗**反应。2007年HValadi等进一步发现细胞之间可以通过外泌体中RNA交换遗传物质。随着有关外泌体研究越来越多，研究者发现它普遍参与了机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、**生长于侵袭等各种生物过程中。外泌体提取试剂盒，南京英瀚斯。

外泌体没有限定单一的分离手段，多种手段都可以进行细胞外囊泡的富集。《指导要求》编写者们认为“高回收率，低特异性”的富集手段是指那些富集囊泡的同时会有大量的非囊泡组分被富集，甚至细胞的整个分泌组都会被掺入其中，归入这一类的分离手段主要包括通过改变电荷或通过高聚物作用的沉淀试剂盒、低分子量截流的超滤分离、超长时间和超高离心力的超速离心等。 目前较常用的外泌体提取方法是differential centrifugation (DC)——差速离心法。也有用试剂盒提取外泌体，但效率均不高。外泌体组学_外泌体测序 南京英瀚斯生物。重庆细胞外泌体粒径分析

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外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现于早期以及回收的核内体中，RAB7 和 RAB9主要出现于晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。福建推荐的外泌体粒径分析

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