动物本模型可用大、小鼠、兔等实验动物造模，本文小虫主要介绍在小鼠上的造模过程。8周龄，24g体重的C57BL/6小鼠（二）试剂耗材1、实验试剂TNBS、橄榄油、无水乙醇、1mL注射器、软管（可用胆汁插管的软管）、涡旋仪2、试剂配制首先将TNBS溶于水，配制成5%TNBS（w:v）水溶液，然后配制橄榄油与**比例为1（v:v）的均匀混合溶液，使用该混合液将5%的TNBS稀释为1%的TNBS溶液（或首先将TNBS溶于水，配制成（1.5x1.5cm），取配制好的1%的TNBS溶液150μL均匀涂抹在去毛位置，七天后，动物称重并标记，小鼠麻醉后使用1ml注射器通过软管将100μL的1%TNBS缓慢注射进入小鼠直肠内（软管插入直肠的长度大约4cm），小鼠倒立保持约1min，然后将动物放置回笼内，造模后持续观察动物状态，通过DAI评分判定动物成模情况。动物模型的优越性主要表现在以下几下方面。江苏豚鼠动物模型技术
根据gm20541的cdna序列设计引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3；(g)以提取的cdna为模板，进行rt-pcr。扩增后进行电泳。结果见图4中b，可以看出，通过rt-pcr方法检测gm20541在gm20541基因敲除纯合子小鼠的视网膜中表达量降低。图4的b中ctrl是指野生型对照，sixko是指gm20541基因敲除纯合子小鼠；gm20541rnalevel是指rna表达水平相对变化，以野生型表达水平为1。实施例3对4月龄的gm20541基因敲除纯合子小鼠进行erg视力检测：1暗适应动物应整夜暗适应，环境应做到没有光线；2次日麻醉：称重，腹腔内注射；宜深度麻醉；3动物固定及散瞳：麻醉完成后，在暗红光照明下将小鼠用胶带固定在动物试验平台的前方：需保证小鼠正"趴"，即相对于闪光刺激器的刺激口，双眼高度一致，充分暴露，滴加散瞳剂。4电极安装：将视网膜电图仪(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)预热后，在耳夹电极涂上导电膏，夹尾巴，插入放大器“地”接口；双头的针电极插入后颈皮(大约在两耳中间)，同时接两个通道的“负”接口；金环电极夹在动物实验平台的电极支架上，仔细调整其角度。上海外包动物模型可以严格控制实验条件，增强实验材料的可比性。
模型研究：研究发现，小鼠肝脏特异性过表达尿激酶型纤溶酶原蛋白（urokinase-typeplasminogenactivator，uPA）可引起肝细胞坏死，即uPA转基因小鼠可以作为肝损伤模型。但是uPA转基因鼠的缺点是死亡率高，难于繁殖。基于此，北京维通达利用基因工程方法开发了可调控的更接近生理性条件的肝损伤模型Tet-uPA转基因小鼠。这种小鼠转入了两个基因片段，Alb-rtTA和TRE-uPA，构成在肝细胞内特异表达的Tet-On系统调控的uPA转基因结构。Tet-uPA小鼠在不诱导的情况下是完全健康状态，可以正常繁殖；当用四环素类药物Dox诱导时，uPA在肝细胞内表达，引起肝损伤。既可以用高剂量Dox诱导产生急性肝损伤甚至肝衰竭的表型，也可以用较低剂量持续诱导成为慢
肝损伤模型肝损伤主要指肝实质细胞的功能损伤或坏死。临床肝损伤主要由饮酒、食物中毒、药物毒性、病毒性肝炎、脂肪肝、肝硬化及胆汁淤积症等引起。严重的急性肝损伤可发展为肝衰竭，危及生命；慢性肝损伤则可能向肝硬化、的终末期发展。而肝损伤小鼠模型模型可以用于肝损伤-修复、肝再生机理性研究，也可用于保肝、肝损伤药物的筛选、评价，因此肝损伤小鼠模型的研究意义重大。1、常见研究方法：通过化学物质（如CCl4、D-氨基半乳糖、黄曲霉等）诱导或者肝血管、胆管结扎手术等理化方法可以引起动物肝脏损伤。但化学物质诱导是比较剧烈和不可逆的，不能模拟临床更多见的非化学肝毒性因素的肝损伤的病理状态和机制。通过遗传性的生物学方法造成肝损伤模型可以克服这个问题，并可获得大量特性均一的动物模型。缺血性脑血管病(ICVD)是威胁人类健康与生存的主要疾病之一。
所用仪器为bio-rad的化学发光凝胶成像系统。结果见图1中c和d，可以看出，通过免疫印迹(westernblot)的方法证明了gm20541蛋白在小鼠脑、肝脏、视网膜、心脏、肾脏以及脾中均有表达。实施例2本实施例以小鼠为目标动物，对本发明提供的视网膜色素变性疾病模型的构建方法进行说明，gm20541基因敲除的路线如图2所示，具体操作如下：基因敲除小鼠获取步骤：1将与小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有报告基因gfp的表达框、有neo抗性基因的表达框、两端有同向排列loxp位点的第3外显子和3’端臂克隆到bac载体(图2)以用于替换欲敲除的gm20541基因第3个外显子；2利用dna同源重组技术将gm20541基因中的第3个外显子替换，得到gm20541基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞；3利用步骤2得到的胚胎干细胞制备得到含gm20541基因敲除细胞的嵌合体小鼠(图2)；4将步骤3得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选出gm20541基因敲除的杂合子小鼠(图2)。鉴定：实施例2中长距离pcr鉴定阳性子一代鼠的实验结果，扩增5’端长臂使用引物对gm5’lrf和sa3’r，扩增产物为。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。结果见图3中a。骨质疏松症是以骨量减少及骨组织微观结构为特征的一种全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加、易于发生骨折。江苏C57动物模型饲养
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是临床上具有代表性的一种慢性纤维化性肺。江苏豚鼠动物模型技术
再向老师、师兄师姐学习经验和技术，如果实验平台的仪器需要提前预约，建议提前规划好使用的时间。反复总结寻找答案在整个预实验的过程中可能会出现很多问题。比如造模效果欠佳、灌胃操作不当、腹腔注射操作失误、物使用不当等引起动物死亡。每遇到问题都需要自己想办法解决，可以从导师、师兄师姐、文献、贴吧、视频教程等找到答案。比如笔者曾遇到同样的物给药，发现有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠还活蹦乱跳，在反复尝试调整浓度，给药剂量，更换麻醉方式，后来才发现是动物体重秤的准度有问题，导致体重秤得不准。因此，需要自己反复琢磨到底是实验过程中哪一个环节出现问题，逐一排除。也要求在每一个实验步骤需要标准化，统一化，尽可能的排除干扰因素，这样方便在遇到问题快的找到答案。同时，建议每日总结，大到动物死亡原因分析，小到灌胃操作耗时多长时间。建议反复总结出每天实验的优缺点。做任何一个操作之前，建议提前脑海中反复模拟，准备好相关工具和试剂，避免临用之际缺少药的，影响实验操作节奏和个人心情。笔者曾经灌胃操作的时候发现药物竟然忘带了，只好重新回实验室准备，那真叫一个郁闷。仔细记录每日实验过程无论是硕士还是博士。江苏豚鼠动物模型技术
