高通量测序原理

如果你的样品是质粒或者是菌液，那为什么不试试我们的KBSeq呢？准确、迅速，可以说是KBSeq的代名词了，关键是还可以省钱，估计这是很多小伙伴们一定会说，你这个服务单价可比Sanger贵多了，怎么可能会省钱呢？Sanger测序的价格：常规的一代测序基本上要每800 bp就测一个反应，那我们来算一下14000/800=17.5，那基本上就要测18个反应了，按照现在生工官方的价格区间，这个属于反应数在10-49个反应之间的，那每个反应的价格为26元，这样算下来18*26=468元，还要加上引物合成的费用，实验周期的话大概率是要超过15天的。KBSeq全质粒测序的价格：序列长度属于6-15 kb之间，159元，实验的周期大概在5-7天左右。为什么要用单细胞测序技术？高通量测序原理

单细胞测序是什么？单细胞测序是基于高通量测序（Next-generationsequencingtechnology，NGS）方法，检测群体中单细胞基因组、单细胞转录组、单细胞表观基因组及单细胞蛋白组，提供细胞间差异的高分辨率视图，从分子水平揭示细胞奥秘。单细胞转录组测序（Single-cellRNA-Sequencing，ScRNA-Seq）指在单细胞水平上对mRNA进行高通量测序和分析的技术。单细胞转录组测序能获得单个细胞内近万个基因的表达信息，为辨别生物组织中各种细胞类型的转录组特征和全方面揭示细胞之间基因表达的异质性提供了有力的工具[3]。说到细胞异质性（Cellheterogeneity)，就要说到我们为什么要用单细胞测序技术了。16s高通量测序产品10xGenomics Chromium X多通道+高捕获+10x的CellPlex多样本混样技术。

生工高通量测序样品要求，环境样品：如果是新鲜土壤/污泥样品，可以以冰袋运输，不超过3天;如果是冻存过的样品（-20°C或者-80°C冰箱保存），为避免反复冻融，建议用足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，3公斤块状干冰可以维持30-40小时）寄送;如果是水体样品，建议采用滤膜过滤后，将滤膜寄送来生工。生工不负责过滤。要求滤膜3张，冰袋运输，不超过3天。其余特殊环境样品，具体咨询生工高通量测序部。

DNA样品：请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。

单细胞悬液质检方法，在进行单细胞悬液质检时，需要用到以下两大质检利器的辅助：荧光细胞计数仪（主要使用台盼蓝和双荧光AO/PI染色法）进行质检。首先我们先要了解一下细胞质检时染料染色的原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到：细胞浓度（总细胞，活细胞，死细胞）、细胞存活率（台盼蓝和双荧光AO/PI染色）、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。什么是KBSeq全质粒测序？

全转录组测序（Total RNA-Seq），项目介绍：全转录组是指特定细胞在特定状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA（non-coding RNA）。针对非编码RNA的研究主要集中在具有调控作用的miRNA，lncRNA和circRNA。基于二代测序技术的全转录组测序研究，同时分析同一样本中的mRNA，lncRNA，circRNA和miRNA，并且通过关联分析，使研究内容更加系统化，致力于深入挖掘生命现象背后的转录调控问题。组织样品或者总 RNA， 样品名称清晰，干冰运输。KBSeq全质粒测序对于样本的量，要求的也比较少。上海无参转录组高通量测序技术

组织材料样品（提取RNA用）建议将标签用胶带贴到管壁，干冰运输。高通量测序原理

通过显微镜使用血球计数板质检能观察到悬液背景质量和细胞数目及活性的评估。让我们再来回顾一下台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。高通量测序原理

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