上海16s高通量测序NGS

生工其他PCR产物测序，项目介绍：随着基因编辑技术（尤其是CRISPR-cas9技术）的发展，科研人员使用传统的Sanger测序无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是，通过对靶基因区域附近设计引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行高通量测序，可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息，尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序，性价比极高。总DNA 或者包装完好的原始样品（如土壤、粪便、 水体和口腔物）；样品名称清晰，冷藏运输。如有对照与实验样品的区分，标明正常样品与实验样品，如有分组，详细描述分组分析信息，以及分组比较的分析需求信息。ChIP项目至少要求50ng DNA，以Qubit 2.0检测为准。其余具体咨询生工高通量测序部。上海16s高通量测序NGS

生工高通量测序样品要求，环境样品：如果是新鲜土壤/污泥样品，可以以冰袋运输，不超过3天;如果是冻存过的样品（-20°C或者-80°C冰箱保存），为避免反复冻融，建议用足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，3公斤块状干冰可以维持30-40小时）寄送;如果是水体样品，建议采用滤膜过滤后，将滤膜寄送来生工。生工不负责过滤。要求滤膜3张，冰袋运输，不超过3天。其余特殊环境样品，具体咨询生工高通量测序部。

DNA样品：请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。 上海地区基因组高通量测序生工高通量测序部拥有丰富的样品处理经验，日均处理样品200余例。

如果你的样品是质粒或者是菌液，那为什么不试试我们的KBSeq呢？准确、迅速，可以说是KBSeq的代名词了，关键是还可以省钱，估计这是很多小伙伴们一定会说，你这个服务单价可比Sanger贵多了，怎么可能会省钱呢？Sanger测序的价格：常规的一代测序基本上要每800 bp就测一个反应，那我们来算一下14000/800=17.5，那基本上就要测18个反应了，按照现在生工官方的价格区间，这个属于反应数在10-49个反应之间的，那每个反应的价格为26元，这样算下来18*26=468元，还要加上引物合成的费用，实验周期的话大概率是要超过15天的。KBSeq全质粒测序的价格：序列长度属于6-15 kb之间，159元，实验的周期大概在5-7天左右。

使用显微镜进行悬液质检操作时应注意：1.使用血球计数板时，可以提前镜检观察每小格计数室内是否洁净无杂质。若有杂质灰层，则需要多次清洗，直至计数室洁净无瑕；2.质检前将悬液轻微震荡或使用扩口gun头吹打混匀；3.台盼蓝染色后需要尽快完成细胞计数，一般建议不要超过10分钟；4.如果方格中细胞数目过多，难以数清，应当对细胞悬液进行稀释以便于计数；5.对于压在方格界线上的细胞应当计数同侧相邻两边上的细胞数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。截止目前为止，生工生物可是为数不多的同时拥有ChromiumController和ChromiumX平台的公司。

怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。PacBio Sequel/RSII 该测序平台读长超长，平均可达10 kb以上。small RNA高通量测序测序

RNA样品建议用足量干冰运输。上海16s高通量测序NGS

台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。 上海16s高通量测序NGS

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