宝山区酒精肝疾病动物模型建模

1、动物模型名称：二甲基苯蒽(DMBA)致乳腺*大鼠模型2、实验动物种属：SD大鼠3、实验动物性别：雌性4、实验动物年龄：6~8周龄5、实验动物体重：80~100g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：二甲基苯并蒽(DMBA)诱导。大鼠按100mg/kg体重于臀部皮下一次性注射10mg/mL的DMBA溶液1次。正常饲养致24周。2、检测标准：模型组大鼠第5对乳房直径在各测定时间点与正常对照组比较有***性差异；大鼠注射致*剂后乳腺上皮组织逐渐发生有规律的变化，乳腺导管上皮细胞首先发生上皮增生、不典型增生，并逐渐加重，在第9周时可见同一大鼠的多个乳腺出现不同程度的导管上皮增生和不典型增生。第13周开始发现>3mm的乳腺*，至第24周时70%的大鼠发生乳腺*，并可见一只大鼠同时发生多个乳腺*，而同一大鼠的其他乳腺亦呈现出不同程度的上皮细胞增生和不典型增生，提示处于*发生的不同进展阶段。上海东寰告诉您如何选择好的动物模型。宝山区酒精肝疾病动物模型建模

来源：ZSCI基础研究中如果加入动物实验部分则使得研究更加趋于完善，投稿时中稿率也相应会增加。但将动物实验做好却不是一件容易的事情。这篇文章主要讲动物模型的构建技术，把骨科、糖尿病相关的动物模型构建做了一个***的技术汇总，建议先码后读，文章内容有部分做了简化，想看详细讲解可以在文末获取课件！一、骨科相关动物模型1.骨关节炎1）骨关节炎模型构建方法（诱发性）-关节腔内手术法、关节腔注射法。2）模型评分标准①SafraninO染色与OARSI评分（PMID：31046827、30942801）②HE染色与OARSI评分（PMID：30609097）③SafraninO染色与Mankin评分（PMID：30609097）2.骨质疏松症1）骨关节炎模型构建方法去趋法模型PMID：31037128实验动物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下进行双侧卵巢切除术以诱导骨质疏松症，同时对照组小鼠*进行卵巢外置但未切除。2）模型检测指标(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相关指标检测3.类风湿性关节炎类风湿性关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病状态，其特征是滑膜增生，软骨退化和脊椎关节的骨侵蚀4.强直性脊柱炎1）强直性脊柱炎模型构建方法2）模型检测指标。青浦区咨询疾病动物模型建模疾病动物模型建模公司哪家好？

步骤i.将步骤h的吸附柱放入收集管，12000rpm离心2min。步骤j.吸附柱放到一个新的，在吸附柱膜**加入50～200μl灭菌水或者洗脱液，停留5min。(将无菌水或者洗脱液加热到65℃能够增加洗脱的得率)。步骤i.基因组dna定量，洗脱的基因组dna可以通过电泳鉴定。方法2：一种低成本基因组dna的粗提方法：步骤a.每只小鼠剪下一段尾巴(2-5mm)，放入离心管中，加入100μl尾部消化缓冲液，注意不要剪尾太长；步骤b.将离心管及其内容物于56℃孵育过夜；步骤c.过夜后将离心管于98℃孵育13min，使蛋白酶k失活；步骤d.在微型离心机以**大转速旋转15min，上清直接用于pcr体系(每50μlpcr体系加入上清2μl)。尾消化缓冲液成分：50mmkcl10mmtris-hcl()％tritonx-100(b)长链pcr反应：长链引物：pcrprimers1(℃):扩增片段：5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):扩增片段：3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’pirb基因敲除型有上述两条扩增片段，野生型等位基因没有扩增产物。

步骤3、pmsg处理c57bl/6雌性小鼠(6周龄，平均体重20g)，46h后注射hcg，与雄性小鼠合笼交配，次日取受精卵进行显微注射，将步骤1的grna1、grna2、cas9蛋白以及线性化后的打靶载体一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，产出小鼠，即f0代小鼠。上述步骤中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl，cas9蛋白购自newenglandbiolabs，货号为m0386m。步骤4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr扩增产物测序，鉴定是否为嵌合体。本发明用于f0代小鼠pirb基因pcr鉴定的特异性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1对应的扩增产物大小为，primers2对应的扩增产物为。用于f0代小鼠测序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。明确研究疾病的独特资源确定小鼠疾病模型的初步选择。

实验期间每天进行阴道涂片，观测动情周期变化。进一步地，检测***水平是指：检测雌***(e2)、促卵泡生长素(fsh)和促黄体生成素(lh)的水平。进一步地，检测对比卵巢重量是指：比较各组大鼠双侧卵巢脏器系数。进一步地，阴道涂片是指：采用阴道脱落细胞涂片法，使用染色剂为亚甲基蓝。本发明利用顺铂成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型奠定了良好的基础。本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。附图说明图1：e2水平检测结果示意图。图2：fsh水平检测结果示意图。图3：lh水平检测结果示意图。图4：大鼠体重检测结果示意图。图5：大鼠卵巢重量统计示意图。图6：动情周期检测(光镜下10倍)示意图，其中，a、b、c、d依次为：动情前期，动情期，动情后期，动情间期。图7：he染色观察不同方法造模对卵泡形态的影响(光镜下10倍)示意图，其中，a、b、c、d依次为：空白组，2mg组，4mg组，6mg组。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下~大量的遗传变异可作为研究人类疾病的借鉴。浦东新区疾病动物模型建模说明书

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上海东寰生物科技有限公司模型特点：造模时的致敏激发的时间间隔、剂量和频次不尽相同，通常获得的是嗜酸细胞性。若要研究其他表型的，需要调整剂量、改变流程或者添加LPS等试剂。COPD动物模型1.诱导模型实验动物：小鼠、豚鼠、大鼠造模试剂：烟雾、空气污染物及有害气体（PM2.5、臭氧、二氧化氮）、脂多糖、弹性蛋白酶获得方式：动物全身长时间放置在密闭容器内，暴露于烟雾、空气污染物或者有害气体；气管内滴注脂多糖或者弹性蛋白酶。宝山区酒精肝疾病动物模型建模