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将序列粘贴到序列框中，同理更改名字以及添加酶切位点序列（下游酶切位点是BamHI）和保护碱基的序列，然后点击“addprimertotemplate”-生命科学软件点击“Map”，Ctrl键选择两个引物（如图），点击“Action”→“PCR”点击“PCR”，即获得扩增产物-生命科学软件打开表达载体序列，按Ctrl键选择两个酶切位点（蓝色标记的），点击“Action”→“Restrictioncloning”→“Insertfragment”点击“Insert”，选择刚刚扩增产物的文件“A”，然后分别输入相应内切酶的名字，点击插入的片段。在右下角点击“Clone”即可。

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