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点击序列可以查看区域内的可用酶切位点。我们可以看到所有酶切位点中，在我们实验室有的酶又不会把基因切碎的酶*有Nde1,EcoR1,而Pst1不在载体的酶切位点上，所以排除。这里我们选择双酶切法，所以选择了Nde1,EcoR1两个位点，其中Nde1在前，EcoR1在后-生命科学软件查看可以插入的酶切位点后，返回到目的基因的DNA文件。点击primerforward序列，点击Insertions,***列绿色方框不要管，这个方框是用来添加氨基酸，在构建载体过程不需要调整。把第二列红色方框改成***个酶切位点基因Nde1,然后点击insert.并在前面添加G或者C为保护碱基（也可以网络查询适用的保护碱基）。-生命科学软件。

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