一体化数字PCR市场前景

20世纪末，Vogelstein等提出数字PCR(digitalPCR，dPCR)的概念，通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元至少包含一个拷贝的目标分子(DNA模板)，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。相同模板进行 96 次扩增，终点处产物量不恒定，但 Ct 值却极具重现性。一体化数字PCR市场前景

在精细诊疗领域，患者外周血中的循环DNA（ctDNA），在的早期筛查，围术期监测，药物疗效评估，预后等方面具有重要的临床应用价值。在肺液体活检领域，EGFR突变由于其在东亚人群中的高突变率,实现精细检测显得尤为重要。研究表明，相较于荧光定量PCR，数字PCR对于血液ctDNA的检测灵敏度更高（0.01%），EGFR突变的阳性检出率也更高。在患者术后复发检测中，数字PCR评估出的ctDNA阳性，可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。因此，该项技术在肺精细诊疗中具有重要的作用。一体化数字PCR性能特点通过数字PCR技术可建立多重荧光体系，用于同时检测比如非小细胞中常见的MET和HER2耐药扩增。

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数字PCR技术流分类目前，dPCR的基本方法都已经建立，根据反应单元的不同形式，主要可分为微板式、微腔式和和微滴式三大类系统。微液滴制备的方法，目前主流的有四种：1）芯片微孔物理分割法，俗称物理分隔法，公司有Fluidgm，Qiagen，Roche，ThermoFisher，;2）液滴分割法，俗称油包水，代替公司有Bio-Rad;3）杂交式芯片液滴法，公司有Stilla;4）注射振动制滴法。PS：芯片式物理分割技术所有已经过期，目前有不少公司在这个技术的基础上进行开发，例如罗氏。三重ddPCR检测体系存在的问题：不同位点检测体系之间的cross-reactivity。

全自动样本制备系统DMX-1000配备气流发生装置和气压控制装置，能够实现高精度压力控制，结合**产品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技术，DMX-1000可以在70秒内快速、稳定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴数量可达2万-60万个，粒径范围30-120μm，性能稳定。除此之外，锐讯还提供微流控芯片的定制服务，以满足不同的液滴数目和尺寸要求。平板式快速扩增仪TC-1000，不再使用传统的96孔板，而是特制的液滴扩增芯片；不再是传统的“烧开水”加热模式，代之以平板式单液滴层均匀受热的方式。在这样的改进之下，TC-1000完成40个PCR循环只需约45分钟（TC-2.0升级版更是把时间缩短到了25分钟！），大幅缩短了等待时间，提升了实验进度。这对实验人员而言，无疑是莫大的福利——高效完成工作，不加班——爱工作，也爱生活。数字PCR是直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的定量。一体化数字PCR市场前景

在患者术后复发检测中，数字PCR评估出的ctDNA阳性，可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。一体化数字PCR市场前景

基于微滴的QX100dPCR仪，利用油包水技术，将样品平均分配到20000个微滴油包水中，利用微滴分析仪对微滴进行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR仪，在高压气体驱动下，将每个标准反应体系分割成包含100万至1000万个皮升级别微滴的反应乳液。数字PCR就形成了2大派别，芯片式和微滴式。不论是哪种数字PCR，其原理都是有限稀释，终点PCR和泊松分布。将含有核酸模板的标准PCR反应体系，平均分配成几万个PCR反应，分配到芯片或微滴中，使每个反应中尽可能含有一个模板分子，进行单分子模板PCR反应，通过读取荧光信号的有或无进行计数，经过统计学泊松分布的校准进行定量。一体化数字PCR市场前景

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