辅助生殖4大通用技能一技能:人工授精二技能:体外受精三技能:卵巢移植四技能:单精子显微注射技术一般而言,体外受精是妥妥的主加技能,应用***。1.单精子显微注射技术单精子显微注射技术(简称ICSI,即Intracytoplasmicsperminjection的英文缩写)指胞浆内单精子显微注射技术。该技术是借助显微操作系统将单个精子头注入小鼠卵子胞浆内,使卵子受精,体外培养到早期胚胎,再放回母体子宫内发育着床。在临床上,ICSI即第二代“试管婴儿技术”。PMM可用于移去卵细胞内的染色体,它可以用平口针迅速的穿透透明带,而无须用尖头针。北京PMM 压电胚胎干细胞

Piezo-ICSI程序:使用直径100-mm的细胞培养皿上盖,准备操作盘;按照Piezo操作系统的要求,将4μL左右的汞从后部装入注射针中,轻轻将汞推至针尖处,在20-25℃室温下,准备进行显微操作。具体操作前,首先取10枚卵母细胞置于15L含3%suerose的HEPES-CZB操作滴中备用;然后将2.5μL精子溶液与5pLHEPES-CZB+12%PVP-360操作滴充分混合;再将单个精子从尾部吸入注射针,用Piezo脉冲从颈部断开头和尾;连续剪切5个精子后,将吸入全部精子头的注射针转移到放置卵母细胞的操作滴中,准备将精子头逐个注射至卵母细胞质中。注射时,从时钟9点的方向吸住卵母细胞,使纺锤体保持在6点或12点的位置,从3点的方向轻轻进针,同时用Piezo脉冲击穿透明带,将透明带碎片吹出注射针的同时,将精子头吹至针尖处,继续进针,直至针尖插入卵母细胞深处,几乎贴近对侧质膜时,用Piezo弱脉冲击穿卵母细胞质膜,将精子头吐出,回吸注入卵内多余的操作液,轻轻退针,完成一次注射。依次操作,尽快实现该批卵母细胞的注射,室温放置5min,然后用大量CZB溶液洗涤ICSI胚胎,并且移入CO₂箱培养。依法进行第二批卵母细胞的精子头注射,在注射HCG后17h,完成全部卵母细胞的精子注射。美国精子制动压电活检PMM加载于显微操作设备的注射端,兼容性强,安装简便。

压电破膜仪在生殖中的应用主要是通过压电效应进行细胞穿孔,以便进行随后的显微注射和操作,从而提高各种操作的成功率。压电破膜仪利用压电元件产生的驱动力,可以良好地穿刺各类样品,如哺乳动物的卵母细胞和胚胎,用于ICSI(胞浆内单精子注射)等操作。这种技术操作温和,样品无变形,刺破细胞膜时无细胞质抽吸或搅动,操作简单且安全可靠。在生殖医学中,压电破膜仪的具体应用包括:卵胞质内单精子注射:通过压电脉冲穿透卵子的透明带,将单精子注入卵胞质内,完成受精过程。这种方法适用于高龄女性或精子质量较差的情况,能够降低卵子退化率,提高卵子正常受精率和胚胎成活率。胚胎移植:在胚胎移植手术中,压电破膜仪可以帮助精确地将胚胎注入母体子宫,提高移植成功率。这些应用不仅提高了生殖医学中的操作成功率,还为高龄女性和其他生育困难的患者提供了更多的生育机会。
1927年,伍德(R.W.Wood)与鲁密斯(A.L.Loomis)首先使用高功率超声波。使用蓝杰文型的石英换能器配合高功率真空管,在液体中产生高能量,使液体引起所谓的空腔(cavitation)现象。同时也研究高功率超声波对生物试样的效应。在水下音响(underwatersound)的研究中发现,石英晶体并不是很好的换能器材料,但是它的振荡频率却不随温度而变,亦即所谓的具有低的温度系数。这种频率对温度的高稳定性,用在控制振荡器的频率,及某些滤波器上**有用。1919年,卡迪(Cady)教授***次利用石英当做频率控制器,图四就是**早期的晶体控制振荡器电路。因为晶体具有极高的Q值(注三),振荡器的频率受到晶体共振频率的控制,且频率不随温度变化而变。后来,皮尔士和皮尔士-米勒(Pierce-Miller)又发明一种以后广被采用的晶体控制振荡电路。在第二次世界大战中,大约使用了一千万个晶体振荡器,用以建立坦克与坦克之间及地面和飞机之间的通讯。与传统ICSI方法相比,Piezo-ICSI增加了显微注射的速度和准确率,利用MII转基因的方法有效的生成转基因鼠。

**近几年来,Piezo-ICSI法(压电显微受精法)被高度重视。使用了Piezo-ICSI法,与常规的显微受精技术相比,对卵子的损害更小。结果显示,用Piezo法会提高受精率,之后受精卵的发育也更好。Piezo-ICSI压电显微受精方法,与传统ICSI显微受精方式不同,采用平口而不是尖口的精子注射针,通过超音振动技术打开卵子透明带再将精子注入卵子,从而一定程度上减少了注射过程对卵子产生的损害,使高龄女性胚胎养囊率有所提升。临床数据显示,特别是针对一些大龄及反复受精失败的情况,Piezo-ICSI比常规ICSI方法的受精率从66.4%提高到79.4%,受精以后的退化率(即停止分裂)从18.6%降低到11.9%。而妊娠率从14.9%提高到23.1%。操作稳定性更强事实上相较Piezo法,常规的显微受精方法从稳定性上更难操作。用汽车来举例的话,Piezo法相当于自动档汽车,常规的显微受精方法相当于手动档汽车,Piezo法可以缩短培养师的培训时间。日本只有10家能做Piezo即使在日本,采用Piezo法的医院也不太多。在日本有600家进行体外受精、显微受精的医院,而采用Piezo法的医院或许也就10家左右。从现在起Piezo法的优势会得以重新评估,或许10年,20年后会在世界各地得以普及。压电破膜仪PMM 6用于RNA注射。深圳压电
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Piezo-ICSI令人欣喜的结果早在1999年,《人类》杂志上就发表了关于普通ICSI和Piezo-ICSI在受精率、受精之后退化率(终止分裂率)及妊娠率等方面的数据对比。结果显示,Piezo-ICSI是非常有效的一项技术。通过这种「不强迫」、「不刺激」的「温柔手法」,Piezo-ICSI可以明显提高受精率,且对**终的妊娠结果也起着非常积极的作用!作为平均患者年龄39岁的生殖中心,日本英医院接诊了众多的大龄患者,深知大龄患者由于卵子老化、卵子质量下降,更容易出现受精率和囊胚养成率不高的情况,**终导致试管成功率偏低。因此,盐谷院长决定引进Piezo-ICSI这项技术,来帮助解决大龄患者遇到的难题。通过对比42岁以上患者使用Piezo-ICSI技术后的培养结果,我们发现:受精率、分裂率及囊胚养成率都有所提升,特别是***的囊胚养成率,总体提高了35.9%。44岁患者通过Piezo-ICSI取卵2颗养成2颗囊胚Piezo-ICSI技术在处理卵子时可以**小化对卵子的损伤,因此英医院针对所有40岁以上的患者都在使用显微受精时用到Piezo-ICSI技术。发表于2019年11月的第64回日本生殖医学会的学术报告中,也从临床数据上再次确认了Piezo-ICSI的有效性。北京PMM 压电胚胎干细胞
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