核酸是遗传信息的携带者,是基因表达的物质基础,是分子生物学研究的主要对象。核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和转移RNA(tRNA)。DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中,而RNA主要分布在细胞质当中。如果要对核酸的结构和功能进行研究,不可避免的就要对核酸进行提取和纯化。核酸提取是指把样本中的核酸提取出来;而核酸纯化是为了提高提取从样本中提取出来的核酸的质量。南京正扬支原体核酸提取试剂盒对样品的需求量是多少?苏州支原体DNA提取优点
聚乙二醇(PEG)是一种有机聚合物,无毒,亲水性强,相对分子量6-20k,沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关,同时受离子强度、溶液pH值和温度等因素的影响,采用该方法可将病毒浓缩10倍以上,所以一般用于病毒样本的核酸提取。多离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂。PEG应用于提纯免疫球蛋白(IgG)和沉淀一些细菌病毒,后来逐渐应用于核酸和酶的分离纯化,特别是用PEG分离质粒DNA,已相当普遍。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA,可以在500ulDNA液中加入200ul20%PEG8000(含1.2mol/LNaCl),冰浴20min。该操作的优点在于:操作条件温和,不易引起生物大分子的变性。同时具有极高的沉淀效能,少量的PEG可以沉淀相当多的生物大分子。苏州支原体DNA提取优点南京正扬生物有自动化核酸提取试剂盒吗?
细胞裂解是核酸提取的重要步骤之一,细胞样本裂解的方法包括哪些,在实验过程中我们如何选择符合自己实验要求的细胞裂解方法呢?细胞理解是核酸提取中无法避免的一步,一般来说根据细胞裂解的原理不同大致可以分为三大类:机械裂解、酶裂解和化学裂解。这三种细胞裂解方法无论是在裂解效率上、操作上、所需仪器上还是成本上都是有很大区别的。而且细胞裂解在很大程度上取决于样品类型,更坚固的组织,如植物,与哺乳动物相比则需要更大的力量进行处理。我们在做实验的时候要根据不同的实验要求,选择适合自己本次核酸提取实验的细胞裂解方法。
核酸提取纯化的总原则是要保证核酸一级结构的完整性,防止降解,同时要排除其他分子的污染。因为一级结构是核酸分子**基本的结构,储存着全部的遗传信息,是进一步研究的基础。为了保持核酸的完整性,在提取过程中要注意防止核酸酶对核酸的降解。还要防止化学因素(酸碱等)和物理因素(高温或机械剪切等)引起核酸变性或破坏。制备RNA要特别注意防止核酸酶的作用,因为核酸酶分布很广,活力很高;而对DNA更重要的是防止张力剪切作用,因为DNA分子特别长,容易断裂。对于核酸的提取纯化应达到以下三点要求:①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;②其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到比较低程度;③排除其他核酸分子的污染,如提取DNA分子时,应去除RNA分子,反之亦然。南京正扬自主研发的核酸提取试剂盒的原理是什么?
离心柱法进行核酸提取纯化的优点及缺点汇总。优势:成本底,试剂盒价格不高,每个样本提取的成本低,适用于预算有限的核酸提取实验。高效可靠,提取效率高均一性、重复性较好。在生产检测中适用于下游的检测实验中,应用范围较广。劣势;生长缓慢的菌株核酸量低,在进行样本量较少的提取时差异较大,提取效果不好。洗脱不完全导致核酸流失,在一步洗脱时由于实验员的技术水平不同,可能会由于操作不规范导致核酸洗脱不完全导致核酸流失的情况出现。离心柱的结合能力决定了核酸的总量,如果样本中的核酸浓度过高,离心柱的结合能力不够强,会导致提取出来的核酸总量较少。自动化核酸提取原理。苏州支原体DNA提取优点
南京正扬自主研发的核酸提取试剂盒是用磁珠法提取吗?苏州支原体DNA提取优点
PVP在核酸提取似乎严重可以起到去除杂质,提高DNA纯度的作用。其工作原理是:减少酚类、醌类、单宁类物质的影响,抗氧化作用,络合多酚和萜类物质,防止多酚类褐变而氧化,去除多糖和色素,色素是PCR强抑制剂,必须去除样品液氮研磨及提取缓冲液中加入PVP或PVPP等能络合多酚和萜类物质,离心或氯仿抽提出去,有效防止多酚氧化成醌类,避免溶液变褐色而具有抗氧化能力。提取液中加入适量的PVP或PVPP能提高DNA的纯度,用量根据杂质而定(1-6%),PVP同时能去除多糖,因此将PVP和巯基乙醇配合使用并调整用量,能有效防止多酚污染PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。苏州支原体DNA提取优点
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