ROX原理:主要用于荧光定量 PCR 中的校正和归一化。在反应体系中,ROX 的荧光强度相对稳定,不受 PCR 反应过程的影响。通过检测 ROX 的荧光信号,可以对其他荧光染料的信号进行校正,消除由于加样误差、反应体积差异、仪器波动等因素引起的荧光信号变化,提高定量结果的准确性和可靠性。特点:激发波长约为 570nm,发射波长约为 590nm,荧光颜色为红色。ROX 通常与其他荧光染料如 FAM、VIC 等配合使用,在多重荧光定量 PCR 中,为每个反应孔提供一个稳定的内参荧光信号,以便对不同孔之间的荧光信号进行标准化处理。在多重 PCR 反应中对不同的目标序列进行特异性标记和检测。江苏定量荧光定量PCR仪厂家供应

SYBR Green I是一种双链 DNA 结合染料,它能非特异性地嵌入双链 DNA 的小沟中。在游离状态下,SYBR Green I 发出微弱的荧光,但当它与双链 DNA 结合后,荧光信号会明显增强。在荧光定量 PCR 反应中,随着 PCR 产物的不断合成,SYBR Green I 与双链 DNA 结合,荧光信号强度不断增加,通过检测荧光强度的变化来反映 PCR 产物的量,从而实现对起始模板的定量分析。特点:能与所有双链 DNA 结合,不依赖于特定的序列,因此可用于各种 DNA 模板的定量分析,通用性强。其激发波长约为 497nm,发射波长约为 520nm,荧光颜色为绿色。但由于它非特异性结合双链 DNA,可能会对引物二聚体等非特异性产物也产生荧光信号,需要通过熔解曲线分析等方法来区分特异性产物和非特异性产物。徐州96孔荧光定量PCR仪厂家供应准确的热循环系统对于保证 PCR 反应的特异性和效率至关重要,进而影响检测灵敏度。

荧光标记探针法原理:使用一种特异性的荧光标记探针,它能与目标 DNA 序列杂交。探针的 5' 端标记有荧光报告基团,3' 端标记有荧光淬灭基团。在游离状态下,报告基团发出的荧光会被淬灭基团吸收,无法检测到荧光信号。当 PCR 反应进行时,DNA 聚合酶在延伸引物的过程中,会将探针水解,使报告基团与淬灭基团分离,报告基团发出的荧光信号就可以被仪器检测到。每扩增一条 DNA 链,就会有一个探针被水解,释放出一个荧光信号,荧光信号的强度与 PCR 产物的数量成正比。过程:在 PCR 反应的退火阶段,荧光标记探针会与目标 DNA 序列特异性结合。在延伸阶段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性会将探针从 5' 端开始逐个水解,使报告基团游离出来,产生荧光信号。仪器会在每个循环的延伸阶段检测荧光信号的强度,随着 PCR 反应的进行,荧光信号逐渐增强,同样可以得到 Ct 值。定量依据:与荧光染料法类似,通过标准品建立标准曲线,根据待测样本的 Ct 值在标准曲线上计算出起始模板量。由于荧光标记探针具有特异性,能与特定的目标序列杂交,因此可以更准确地对目标基因进行定量分析,减少非特异性扩增的干扰。
技术创新推动:纳米荧光探针商业化落地,如量子点荧光标记技术使检测灵敏度大幅提升,推动相关设备在疾控中心的采购量增长。多模态检测平台兴起,荧光 — 质谱联用系统在早筛领域的应用,成为三甲医院设备更新的优先选项。智能化设备占比将不断提升,2025 年智能化设备占比预计将突破 40%,AI 驱动的全流程自动化可将检测时间大幅压缩,误差率也更低。市场竞争加剧:2023 年 PCR 仪市场占有率排名的品牌合计占有 70.73% 的市场份额,而 2019 年合计占有率为 94.5%,市场集中度变低,大量新玩家涌入,市场竞争变得更加激烈。各厂家不断创造新的产品形态,开辟新的应用领域,以争取更大的市场份额。结核分枝杆菌的检测,传统的培养方法需要数周时间;

光学系统:包括光源、激发和发射滤光片、检测器等。光源提供激发荧光染料所需的能量,滤光片用于选择特定波长的光,检测器负责检测荧光信号的强度。如 ABI StepOne Plus 实时荧光定量 PCR 仪的光学系统能精确检测不同荧光染料发出的信号。热循环系统:用于控制 PCR 反应的温度变化,包括变性、退火和延伸等步骤。它需要具备快速升降温的能力,以保证 PCR 反应的高效进行。例如,Roche LightCycler 480 实时荧光定量 PCR 仪的热循环系统升温速度快,能有效缩短实验时间。控制系统:负责仪器的操作和数据处理,可设置 PCR 反应的参数,如循环次数、温度、时间等,还能对检测到的荧光信号进行分析和处理,生成定量结果。在药物研发过程中,可用于评估药物对基因表达的影响。镇江FAM荧光定量PCR仪厂家直销
TET 并不是一种特定品牌或型号的荧光定量 PCR 仪,而是一种荧光染料的名称。江苏定量荧光定量PCR仪厂家供应
实时荧光定量 PCR 仪在多个领域都有广泛的应用,以下是一些主要的应用领域:作物遗传育种:在作物遗传改良中,可用于筛选优良基因、鉴定杂种优势以及检测转基因作物中外源基因的整合和表达情况。例如,通过检测与作物抗逆性、产量等相关基因的表达水平,筛选出具有优良性状的品种,加快育种进程。植物病害检测:快速检测植物病原体,如病毒、、细菌等,及时发现植物病害,采取相应的防治措施,保障农作物的产量和质量。例如,检测果树中的病毒情况,为果树的病虫害防治提供依据。江苏定量荧光定量PCR仪厂家供应