SYBR Green I是一种双链 DNA 结合染料，它能非特异性地嵌入双链 DNA 的小沟中。在游离状态下，SYBR Green I 发出微弱的荧光，但当它与双链 DNA 结合后，荧光信号会明显增强。在荧光定量 PCR 反应中，随着 PCR 产物的不断合成，SYBR Green I 与双链 DNA 结合，荧光信号强度不断增加，通过检测荧光强度的变化来反映 PCR 产物的量，从而实现对起始模板的定量分析。特点：能与所有双链 DNA 结合，不依赖于特定的序列，因此可用于各种 DNA 模板的定量分析，通用性强。其激发波长约为 497nm，发射波长约为 520nm，荧光颜色为绿色。但由于它非特异性结合双链 DNA，可能会对引物二聚体等非特异性产物也产生荧光信号，需要通过熔解曲线分析等方法来区分特异性产物和非特异性产物。纯度高、量子产率高的染料能产生更强荧光信号；常州Cy5荧光定量PCR仪要多少钱
荧光定量 PCR 仪的检测结果会受到多种因素的影响，包括仪器设备、试剂质量、样本处理以及实验操作等方面，。加样准确性：在配制反应体系和加样过程中，移液器的使用不准确会导致试剂和样本的加入量出现偏差。例如，加样量过多或过少都会影响反应体系中各成分的浓度，进而影响扩增效率和检测结果的准确性。反应体系配制：反应体系中各成分的比例要准确配制。如果引物、探针、酶、dNTP 等成分的浓度过高或过低，都会影响 PCR 反应的特异性和效率，导致检测结果不准确。此外，反应体系中若存在气泡，可能会影响热传递和荧光信号的检测。实验环境：实验环境的温度、湿度等条件也会对实验结果产生影响。例如，环境温度过高或过低可能影响酶的活性和反应速率，湿度较大可能导致试剂吸潮变质，从而影响检测结果的稳定性和准确性。扬州YELLOW荧光定量PCR仪价格多少核酸浓度和纯度：核酸浓度过低会使检测难度增加；
荧光染料法原理：一些荧光染料（如 SYBR Green I）能特异性地结合到双链 DNA 上。在 PCR 反应体系中，随着 DNA 扩增产物的不断增加，与双链 DNA 结合的荧光染料也越来越多，荧光信号强度与 PCR 产物的数量呈正相关。通过检测荧光信号的强度变化，就可以实时监测 PCR 反应的进程。过程：在 PCR 反应的每一个循环中，当温度降低到退火温度时，引物与模板结合，DNA 聚合酶开始延伸引物，合成新的 DNA 链。此时，荧光染料会结合到新合成的双链 DNA 上，仪器会在特定的时间点检测荧光信号的强度。随着循环次数的增加，荧光信号逐渐增强，当信号强度达到设定的阈值时，对应的循环数被称为阈值循环数（Ct 值）。定量依据：在一定的范围内，起始模板量与 Ct 值呈对数关系。即起始模板量越多，达到阈值所需的循环数越少，Ct 值越小；反之，起始模板量越少，Ct 值越大。通过已知浓度的标准品建立标准曲线，再根据待测样本的 Ct 值，就可以在标准曲线上计算出其对应的起始模板量。
实时荧光定量 PCR 仪在多个领域都有广泛的应用，以下是一些主要的应用领域：疾病诊断：可对病毒、细菌等病原体的核酸进行检测，如、病毒、结核杆菌等，实现疾病的早期诊断。例如，在期间，实时荧光定量 PCR 仪是检测核酸的重要工具，通过检测患者样本中病毒的核酸量，判断是否以及的程度。疾病监测：对于一些慢性疾病，如、心血管疾病等，实时荧光定量 PCR 仪可监测相关基因的变化，辅助医生了解疾病的发展进程、效果以及预测疾病的复发风险。例如，通过检测患者体内特定基因突变的频率和拷贝数，评估的恶性程度和后的残留情况。药物研发：在药物研发过程中，可用于研究药物对基因表达的影响，筛选具有潜在作用的药物靶点。同时，还可监测药物过程中患者体内基因的变化，为个体化提供依据。例如，通过检测患者在使用某种药物前后肿瘤细胞中相关基因的表达水平，判断药物是否有效，并调整方案。准确的热循环系统对于保证 PCR 反应的特异性和效率至关重要，进而影响检测灵敏度。
光学系统：包括光源、激发和发射滤光片、检测器等。光源提供激发荧光染料所需的能量，滤光片用于选择特定波长的光，检测器负责检测荧光信号的强度。如 ABI StepOne Plus 实时荧光定量 PCR 仪的光学系统能精确检测不同荧光染料发出的信号。热循环系统：用于控制 PCR 反应的温度变化，包括变性、退火和延伸等步骤。它需要具备快速升降温的能力，以保证 PCR 反应的高效进行。例如，Roche LightCycler 480 实时荧光定量 PCR 仪的热循环系统升温速度快，能有效缩短实验时间。控制系统：负责仪器的操作和数据处理，可设置 PCR 反应的参数，如循环次数、温度、时间等，还能对检测到的荧光信号进行分析和处理，生成定量结果。若核酸发生降解，会导致扩增片段不完整，影响定量准确性，降低检测灵敏度。镇江荧光定量PCR仪价格多少
与核酸结合特异性强、稳定性好的染料，可减少非特异性信号干扰。常州Cy5荧光定量PCR仪要多少钱
选择适合自己的荧光定量 PCR 仪，需要综合考虑多个因素，实验类型：如果是进行常规的基因表达分析、病原体定量检测，普通的单通道或多通道荧光定量 PCR 仪即可满足需求。例如，赛默飞世尔的 QuantStudio 3，适用于基础的基因表达和病原体检测实验。若是涉及到复杂的多重 PCR 实验、SNP 基因分型，则需要选择具有更多荧光通道、更高分辨率的仪器，如罗氏的 LightCycler 480，可同时检测多个荧光信号，适用于多重分析。通量要求：根据实验样本数量来选择。对于样本量较少的实验，如小型实验室的科研项目或临床诊断的少量样本检测，96 孔板的荧光定量 PCR 仪就足够，如伯乐的 CFX96。而对于高通量的检测需求，如大规模的基因筛查、药物研发中的大量样本筛选，可能需要选择 384 孔板的仪器，如 ABI 7900HT，能提高实验效率，减少实验成本。常州Cy5荧光定量PCR仪要多少钱
