Real-time PCR与普通PCR的实验目的不同，所以对引物的设计要求也不同。普通PCR的实验目的只是为了获得目的基因产物，允许有非特异扩增，只要目标条带清晰明亮，就可以通过切胶回收的方法回收目标条带，之后进行后续的克隆、测序。但Real-time PCR的目的是为了让目的基因按照理论值或是按照接近理论值进行扩增，只有这样的扩增后续由...

  如何区别真假胎牛血清：主要技术指标，1、内的毒性，标准为不高于5EU/ml。内的毒性是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内的毒性含量的高低可表现出采的血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前，国产血清基本都能达到这一要求，很多进口胎牛血清内的毒性含量反而更高，只要求不高于50EU/ml，高出我国标准10倍。可见，内的毒性含量偏高不影响质量，除非...

  Real-timePCR技术服务聚合酶链式反应的试验污染：实验室中克隆质粒的污染：在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力。其污染可能性也很大。污染的监测：一个好的...

  Real-time PCR：所谓Real-time PCR技术，是指在PCR反应体系中加入萤光基团，利用萤光信号累积实时监测整个PCR进程，之后通过标準曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用萤光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标準曲线的分析对起始模板进行定量分析。Real-time PCR技术即实...

  胎牛血清是血液凝固后的液体部分，不含血细胞、纤维蛋白及凝集因子等，含有多种对细胞生长必需的营养因子及大分子物质。血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。此外，重要的是，胎牛血清中含有大量对细胞生长必需的生长因子。胎牛血清也含有一些小分子物质，如氨基酸、糖类、脂类及Hormone类物质。胎牛血清应用在哺乳动物细胞培养中；因此，胎牛血清应用很普遍。比...

  胎牛血清：胎牛血清参与细胞培养，是细胞生长天然的培养基，它为细胞提供生长因子、结合蛋白、脂质、矿物质、黏附和铺展因子等来促进体外细胞培养。透析胎牛血清主要用于可能需要关注小分子浓度的特殊研究。这主要包括四个领域：蛋白质组学、同位素标记、细胞通讯以及报告基因细胞系的筛选，其中有些领域是相互交叉的。以下稍作举例。将13C或15N标记的氨基酸掺...

  胎牛血清-血清的主要成分：血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。胎牛血清在存储的时候要在...

  胎牛血清的处理方法有：热灭活，FBS的常见处理方法是热灭活，其中将FBS在56°C的水浴中加热30分钟，偶尔摇晃。目的是灭活FBS中存在的补体系统的任何成分，以及其他潜在的未知细胞生长抑制剂。以前热灭活也是为了去除支原体污染，这不再是一个问题，因为现在所有的血清产品都通过小到足以去除支原体的孔径进行过滤。必须注意的是，热灭活也可能产生不良...

  Real-timePCR的反应条件：dNTP浓度过高会加快反应速度，但同时还可以增加碱基的错误掺入率。引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增，低则合成产物量减少。TaqDNA聚合酶无校正功能，掺入错误率达2*E-4个核苷酸，一个30个循环的扩增反应0.1%-0.25%总错误率。在9...

  膜片钳技术：膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来，由于电极与细胞膜的高阻封接，在电极笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离，因此，此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管，用一个极为敏感的电流监视器（膜片钳放大器）测量此电流强度，就替代单一离子通道电流。膜片钳技术的建立，对...

  胎牛血清：在细胞培养过程，质量粗糙的FBS可能会导致细胞出现生长速度缓慢、不贴壁、容易老化等现象，从而导致实验受阻。经过质量验证的FBS，则可以十分确定这款FBS对哪些细胞具有良好的培养效果，进而判断其能否把自己的细胞养好。对于质量好的FBS，通常采用血清敏感性细胞（如干细胞）来进行培养验证，若培养效果良好，则其他常规细胞系的培养就更不在...

  膜片钳技术基本原理与特点：又由于玻璃微电极管径很小，其下膜面积光约1 μm2，在这么小的面积上离子通道数量很少，一般只有一个或几个通道，经这一个或几个通道流出的离子数量相对于整个细胞来讲很少，可以忽略，也就是说电极下的离子电流对整个细胞的静息电位的影响可以忽略，那么，只要保持电极内电位不变，则电极下的一小片细胞膜两侧的电位差就不变，从而实...