转染是将外源核酸导入真核细胞的过程,是细胞和分子生物学研究的重要工具,也是大部分的生物和分子生物领域的科研党们绕不开的话题。然而常常听到的抱怨是"转染效率太低""转染完细胞全漂了""转染后忘记给细胞换液了",真所谓辛辛苦苦实验N多回,一夜回到解放前……众所周知,影响转染成功的因素非常多,包括细胞质量、核酸质量、微生物污染、转染试剂等。各种细胞使用的转染条件都可能不同,现实中也并没有一种放之四海而皆准的方案。.0试剂及RNAi复合物非常容易获得:只需简单地混合,并进行孵育(30min)、稀释、及注射即可。上海核酸转染试剂梯度
图2.采用LipofectamineRNAiMAX转染试剂转染A549细胞时,实现了比较好的基因***效果和比较低的细胞毒性。试验采用的LipofectamineRNAiMAX试剂剂量范围为0.1μL-1.0μL之间,在维持优良的细胞活力的同时,实现了p53基因表达水平的有效敲低.功能多样简便的实验方案,易于针对***的细胞系进行优化Invivofectamine™3.0Reagent突破性的体内转染试剂Invivofectamine3.0试剂是一种突破性的体内RNAi输送试剂,可大幅改善实验性能,使用微克级的siRNA即可达到高达85%的敲低效果。非脂质体转染试剂盒无论有无血清、***存在均可获得很高的转染效率。
胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要!!当然也要保证细胞状态特别好,没有细微污染,铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦!载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统,当然使用三质粒系统的小伙伴居多,一定要选择成熟商业化的载体系统!载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失,或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯:建议目的基因载体和阴性对照GFP载体是同一批,且建议每次包装都如此操作,要保证目的基因的表达载体构建纯化良好,质粒间比例得当,并且对质粒进行酶切验证。
图5.Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的siRNA在单次静脉注射后可在肝脏中引起剂量反应的敲低现象。Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的剂量进行注射。随后分离血清并检测FVII蛋白的水平(Biophen显色检测)。持续敲低能力在单次注射后可观察到更长的敲低时间图6.使用三种不同浓度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究剂量效应。siRNA分子与Invivofectamine3.0试剂形成复合物后分别以1、0.5、及0.25mg/kg的剂量进行注射。在第2、5、9、16、23及30日收集血清,并使用显色法对血清进行分析以确定FVII蛋白的敲低效果。低毒性pei转染试剂说明书是什么?
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