.在多种不同类型细胞中基因敲除效率超过90%。高灵活应用,同一试剂可用于siRNA和质粒共转染的基因沉默实验。细胞毒性低,结果相关性好,确保所观察到的细胞效应是由转染的siRNA而非转染过程本身介导。兼容含血清或不含血清的培养基,转染前后均无需换液(如无血清培养基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4种细胞系的HPRT基因沉默实验。根据各试剂说明书建议的操作流程,或标准实验方法,将100nMHPRT特异性siRNA转染至4种细胞,通过LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的荧光定量法评估基因沉默效率。结果显示用罗氏这款试剂在四种细胞中转染后基因沉默表现均表现优异。用于siRNA的转染试剂,还有通用型转染试剂Lipofectamine™.转染试剂多少钱
在选择转染方法时,需考虑您希望输送的运载物(DNA、RNA或蛋白质)以及您希望转染的细胞类型。您可通过下表选择各类阳离子脂质体转染试剂和Neon转染系统。我们提供了各种DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA输送选择,让您可以对自己的结果更加自信.***的输送效果—可转染多种类型的细胞无毒性作用—您之所以能看到结果,是因为核酸存在,而不是因为试剂需要的优化工作更少—针对大多数细胞类型提供了快速、简便的实验方案连续细胞系具有无限增殖的潜能,通常要比原代或有限细胞更易处理。但由于此类细胞经历过基因改变而变得具有无限增殖能力,它们在培养过程中的表现可能无法必然地反映体内状态。上海贴壁细胞系转染试剂供应商但相对于连续细胞系,它们通常更难培养和转染。
对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的cDNA(phRL-CMV)和绿色荧光蛋白GFP的cDNA按照生产商的提供的转染步骤分别转染到CHO细胞。在转染24小时后,荧光素酶的活性使用Beckman公司的化学发光监测器测定;GFP阳性细胞率使用BD公司的FACS检测。左图:LipoD293试剂(升级版)和Lipofecatmine2000(L2K),TransIT以及Fugene6的价格比较(美元/1000微升)。所有的价格是从生产制造商的网站上收集对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧
LNCap细胞的培养和传代严格由ATCC建议的操作步骤进行,与pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共转染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293™试剂(左图)和FugeneHD(右图)分别按照生产制造商的科学实验步骤进行转染。转染24小时后,用尼康Eclipse2000荧光显微镜检测GFP荧光,以此来评价转染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2细胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分别转染达到95%的细胞融合。转染48小时后,分别通过Zeiss510激光共聚焦显微镜和β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测效率。赛默飞提供了多种高质量的转染产品,适用于各种细胞类型的转染。
基于磷酸钙成分的转染试剂,其主要作用原理是与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物,粘附到细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。pH值,钙离子浓度,DNA浓度,沉淀时间,细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响,因此实验条件摸索和优化时间较长,且重复性不佳。基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。目前应用比较***的是带正电的阳离子脂质体转染试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。此方法操作简单,重复性好,在体外转染中有很高的效率,但具有一定的细胞毒性,可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响,需要去除血清。siRNA脱靶效应会导致细胞死亡,并引起分析问题。体内转染试剂报价
转染是将核酸导入真核细胞中的过程,是细胞生物学、基因表达和基因***实验中的关键步骤。转染试剂多少钱
图7.对注射了Invivofectamine3.0试剂的小鼠样品进行血液化学分析。将Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的复合物分别以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未处理[U]的剂量注射入小鼠体内。在注射后2、24及48小时收集血液样品,并通过临床化学检测方法对数个生物标志物(Antech)进行评估。结果表明在使用Invivofectamine3.0试剂进行转染的每个个体间所检测的生物标志物的水平与未注射该试剂的个体相比并没有***差异。除了以上两种于siRNA的转染试剂,还有通用型转染试剂Lipofectamine™2000,Lipofectamine™3000和Neon™转染系统也可以用于siRNA转染转染试剂多少钱
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