上海常用转染试剂类型

转染48小时后，使用尼康荧光显微镜GFP荧光进行成像（左侧四幅图），A：LipoD293；B：293fectin；C：Xfect和D：Fugene6.带有6xHis标记的GFP荧光蛋白使用Ni-NTA亲和柱技术实现分离。5微升洗脱液载入SDS-PAGE凝胶电泳分离并进行Coomassie亮蓝染色（右上图E），道1为LipoD293293、道2为标准蛋白分子、道3为Xfect、道4为293fectin和道5为Fugene6。这四种转染试剂产生蛋白质的效率被进一步定量（见右下图F）。产生慢***的比较通过LipoD293™试剂（升级版）和LipofectamineLTX（LTX）试剂将三个cDNAs共转染进293T细胞。一个GFP载体，pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用来测定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T细胞，其次是分别添加不同量的慢定都上清液，1微升（上图）和10微升（下图）。但相对于连续细胞系，它们通常更难培养和转染。上海常用转染试剂类型

对CHO细胞转染效率的比较右图：使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的cDNA（phRL-CMV）和绿色荧光蛋白GFP的cDNA按照生产商的提供的转染步骤分别转染到CHO细胞。在转染24小时后，荧光素酶的活性使用Beckman公司的化学发光监测器测定；GFP阳性细胞率使用BD公司的FACS检测。左图：LipoD293试剂（升级版）和Lipofecatmine2000（L2K）,TransIT以及Fugene6的价格比较（美元/1000微升）。所有的价格是从生产制造商的网站上收集对CHO细胞转染效率的比较右图：使用以上转染试剂将编码荧上海常用转染试剂类型RNAiMAX转染试剂是先进、高效的siRNA输送解决方案。

.在多种不同类型细胞中基因敲除效率超过90%。

高灵活应用， 同一试剂可用于siRNA和质粒共转染的基因沉默实验。

细胞毒性低，结果相关性好，确保所观察到的细胞效应是由转染的siRNA而非转染过程本身介导。

兼容含血清或不含血清的培养基，转染前后均无需换液(如无血清培养基)。

X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4种细胞系的HPRT基因沉默实验。根据各试剂说明书建议的操作流程，或标准实验方法，将100nM HPRT特异性siRNA转染至4种细胞,通过LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的荧光定量法评估基因沉默效率。结果显示用罗氏这款试剂在四种细胞中转染后基因沉默表现均表现优异。

胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要！！当然也要保证细胞状态特别好，没有细微污染，铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦！载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统，当然使用三质粒系统的小伙伴居多，一定要选择成熟商业化的载体系统！载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失，或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯：建议目的基因载体和阴性对照GFP载体是同一批，且建议每次包装都如此操作，要保证目的基因的表达载体构建纯化良好，质粒间比例得当，并且对质粒进行酶切验证.转染复合物制备完成； 混匀后室温下孵育15-20分钟，直接取10μL加入已铺好细胞的孔中.

转染是将外源核酸导入真核细胞的过程，是细胞和分子生物学研究的重要工具，也是大部分的生物和分子生物领域的科研党们绕不开的话题。然而常常听到的抱怨是"转染效率太低""转染完细胞全漂了""转染后忘记给细胞换液了"，真所谓辛辛苦苦实验N多回，一夜回到解放前……众所周知，影响转染成功的因素非常多，包括细胞质量、核酸质量、微生物污染、转染试剂等。各种细胞使用的转染条件都可能不同，现实中也并没有一种放之四海而皆准的方案。原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖.上海转染试剂供应商

各种转染试剂成分分析.上海常用转染试剂类型

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