病毒宏基因组测序基本参数
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病毒宏基因组测序企业商机

优化临床制备病毒宏基因组测序样本的方法:①介绍高通量病毒宏基因组测序的样本制备步骤,对临床样本的总核酸进行随机扩增;②检测了从血浆样本中富集/扩增DNA及RNA病毒的不同方法,一种包括过滤、核酸酶消化、在不同反应中随机扩增DNA及RNA的步骤是较好的;③随后在包含了不同病毒科的样本中验证此方法,可高读数地检测到大多数病毒序列,且优于现行的其它样本制备方法;④该方法不仅适用于血浆样本,还可用于尿液、咽喉拭子等临床样本。宏基因组测序克服了传统的纯培养方法的技术限制。成都土壤微生物测序原理

病毒宏基因组:宏基因组学或元基因组(metagenomics),其定义为“Thecollectivegenomesofsoilmicroflora”。该学科可追溯到第1次提出环境基因组学的概念,在对太平洋浮游生物进行系统分类时构建了第1个噬菌体文库,并发现了15种全新的细菌序列。宏基因组学概念是“土壤中所有微生物基因组的总和”命名为土壤宏基因组,系统给出了宏基因组的概念,提出针对特定环境样品中遗传物质总和进行非培养研究。对宏基因组进一步概括为“应用现代的分子生物学技术直接从环境中获取的目的微生物群落基因组,叫宏基因组”。浙江宏基因学分析技术传统Sanger测序相比,NGS技术的发展使得一个小的研究小组可以拥有大量病毒株的全基因组序列。

宏病毒组学(ViralMetagenomics)是宏基因组学的一个分支,但与传统的宏基因组学概念不同,它是在宏基因组学概念的基础上,结合病毒自身的特点,将宏基因组学方法应用到病毒学领域而形成的。2002年,Breitbart等(BreitbartM,etal,2002)将宏基因组学方法应用于海洋病毒群落的研究,发现噬菌体为海水中主要病毒组,这一研究标志着宏病毒组学正式应用于科学研究。简而言之,宏病毒组学就是应用特殊方法把特定环境中所有病毒与其他微生物分开,然后提取的病毒核酸,用高通量技术进行病毒核酸测序,依托现有数据库进行相应的比对工作,并运用软件分析处理后得到研究样品中病毒群落的组成信息。

病毒宏基因组学文库中包含兆级的短序列片段(Reads)。通过不同的序列拼接软件将Reads拼接较长的DNA序列片断(Contigs)。数据组装可通过K-mer分析评估各个样品的测序深度,通过对SOAPdenovo设置不同K值,筛选较好组装结果,对较好组装结果进行校正,并统计Reads利用率。接着利用已测序生物体的DNA序列构建数据库,将拼接后的Contigs通过不同的鉴定方案,与数据库里的DNA序列信息进行比对,确定该序列来自的生物群落,筛选有用的基因信息。此外,还可以用一些工具对序列进行基因预测(如Metagene、GeneMark,FragGeneScan等)。DNA病毒基因组测序:获得一种指定DNA病毒尽量完整的序列。

病毒是地球上数量多的生物实体,其中细菌病毒(即噬菌体)约有1031个类群,从海洋到陆地再到人体几乎都是它们的栖息地。研究者将病毒视为调节人类生态系统的重要成员,人体内主要包括真核病毒和噬菌体,包括双链DNA(double-strandedDNA,dsDNA),单链DNA(single-strandedDNA,ssDNA)和RNA病毒。随着对病毒研究的普遍开展,“病毒组”与“病毒组学”的概念也应运而生,这些术语分别涵盖了栖息在生态系统中的所有病毒及其基因组和对它们的研究(LefkowitzEJ,etal,2017)。根据病毒不同的特征进行分类,包括病毒的宿主范围;病毒的形态学;病毒的基因组大小;病毒的核酸组成成分以及病毒的致病性。虽然所有的性状在病毒分类学的确定中都很重要,但目前利用平均核苷酸同源性(ANI)和系统发育关系进行序列比较被视为定义和区分病毒群类的主要标准。病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸,必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的生物。重庆宏病毒组测序

病毒全基因组测序产品特点:无需培养和特异性扩增,对采集临床样本直接检测。成都土壤微生物测序原理

传统微生物检测由于时间长、阳性率低、检测目标单一,限制了传染疾病的诊治。宏基因组测序技术不依赖于微生物的分离培养,克服了传统的纯培养方法的技术限制,为研究和开发利用占微生物种类99%以上的未可培养的微生物提供了一种新的途径和良好的策略。宏基因组测序以无需纯化培养、能够快速全方面的展示序列信息的优势,逐步在临床上得到了普遍应用。病原宏基因组测序检测出病原体并报告相应被检测出的序列数,再依据大数据库判定是否为致病病原体。然而不同的测序平台采用不同的数据库,再由不同的研发、临床和检验**解读,缺乏统一标准,结果也会出现差异。因此仍需将病原宏基因组测序检测数据和临床更好的结合,从而更准确鉴定致病病原体。成都土壤微生物测序原理

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