高通量测序在病毒准种研究中如何应用在采用高通量测序技术研究准种耐药性方面,人类免疫缺陷病毒(HIV)较为突出。人类免疫缺陷病毒的逆转录酶有非常大的错配倾向,造成几乎每复制1轮出现1个碱基对替换突变。被侵染的个体中存在非常巨大的病毒群,每天有1010个病毒粒子产生和死亡,在侵染后这种行为导致病毒快速形成一个多样性的群,即准种。高通量测序是研究大群体中序列突变体特征的先进方法,它的一种应用是对个体抗病毒治疗失败时产生的数量很少的耐药突变的定量研究。探普生物专门针对病毒数据搭载了生物信息学分析流程。武汉高通量测序突变分析原理
目前对我国首例输入性裂谷热病例病毒进行全基因组测定,分析其进化来源及潜在变异.方法提取样本核酸,非特异性反转录扩增病毒基因组RNA,使用IonTorrent二代测序仪进行病毒全基因组测定.对获得的基因组数据进行序列拼接、比对、进化树构建和关键位点分析.结果通过测定获得了病毒全基因组11979nt,该测定病毒属E基因分支,序列与先前南非分离株Kakamas相似度较高(>98%).病毒Gn蛋白C端信号肽区存在1个氨基酸突变.结论本研究分析测定的裂谷热病毒全基因组与目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出现明显变异。四川病毒二代测序哪家好Sanger测序准确度高,读长很长。
RNA/DNA病毒测序对病毒基因组进行测序是快速了解病毒突变、毒力变化、病毒型别的有效方法。可以根据病毒基因组大小和类型,采用PCR、RT-PCR或shotgun测序法,对病毒的部分或全长基因组测序,结果准确可靠。服务标准:测出的序列准确性在99%以上;病毒全基因组测序测出序列在总基因组大小95%以上;数小于5个;Shotgun测序的覆盖度在6以上;PCR和RT-PCR测序达到2。服务说明:1、提供病毒DNA或RNA作为样品。2、PCR测序的DNA样品总量大于5μg,浓度大于20ng/μl。DNA无降解。3、Shotgun测序法的DNA样品总量大于20μg,浓度大于100ng/μl。DNA无降解。4、用RT-PCR和PCR测序法在提供参考序列时需同时提交样品部分序列与参考序列的比对文件,确保同源性在95%以上。
病毒的基因重组特点是什么?灭活病毒间也会发生重组:例如用紫外线灭活的两株同种病毒,一同培养常可使灭活的病毒复活产生出侵染性病毒体,此称为多重复活(Multiplicityreactivation),这是因为两种病毒核酸上受损害的基因部位不同,由于重组相互弥补而得到复活。因此现今不用紫外线灭活病毒制造疫苗,以防复活。死活病毒间发生重组:例如将能在鸡胚中生长良好的甲型流感病毒(A0或A1亚型)疫苗株经紫外线灭活后,再加亚洲甲型(A2亚型)活流感病毒一同培养,产生出具有前者特点的A2亚型流感病毒,可供制作疫苗,此称为交叉复活。二代测序可以用于对病毒的全基因组进行测序有哪些挑战?
在哪些应用场景需要对病毒的全基因组进行测序?在探普生物长时间运行过程中,我们接触到的对病毒的全基因组进行测序项目有比较丰富的应用场景。先,从事基因进化/疫苗/药品/抗体研制方向的研究的研究者一定会用到测序。这种场景一般是用密集的sanger测序监测某几个关键基因,搭载一定频率的全基因组测序。这样的组合省时省力省经费,同时能达到研究目的。此外,有的单位需要对传染病的病原进行流行病学监测和研究,如疾控/疫控中心、医院的传染病科室以及一些高校和研究所的相应课题组,可能需要对病毒的全基因组进行测序以后,结合其他上下游的研究数据,达到研究或者监测疫病的目的。病毒全基因组测序定使人类从根本上认知疾病发生的原因,做到正确的调整疾病和尽早的预防疾病。病毒序列测序进化分析技术
想要通过高通量测序获得病毒全序列,需要经历:核酸纯化-文库构建-生物信息学分析这三大基本流程.武汉高通量测序突变分析原理
在病毒全基因组测序中,生物信息学的工作主要包括以下几个方面:序列组装:将测序得到的短reads进行组装,得到较长的基因组序列。这一步需要结合多种方法和算法,如比对算法、短reads组装算法等。序列注释:对基因组序列进行注释,包括基因预测、基因功能注释、基因组结构注释等。系统发育分析:通过比较不同病毒基因组序列的相似性,确定不同病毒的进化关系。基因功能预测:通过比较基因组序列与已知的蛋白质序列,预测基因组编码的蛋白质的功能。变异检测:通过比对不同个体的基因组序列,检测其中的变异,包括单核苷酸多态性(SNP)、插入缺失等。数据分析:对测序数据进行质控、过滤、拼接、比对、序列注释、系统发育分析、基因功能预测、变异检测等一系列分析,生成相应的数据报告。综上所述,生物信息学在病毒全基因组测序中扮演着非常重要的角色,探普生物通过对基因组序列进行分析和解读,能够帮助我们更好地了解病毒的遗传信息、进化历史、生物学特征等方面的信息。 武汉高通量测序突变分析原理