宏基因组测序的挑战:背景干扰,病原样本深藏在大量宿主和其它微生物之内,临床病原常为起始量低,背景噪音大的复杂样本,大量宿主信号掩盖了微量病原信号,致使敏感性偏低,难以有效区分。另外,因为RNA病毒需先转化为互补DNA(cDNA)再进行测序,因此病原宏基因组测序技术对RNA病原体检出率比DNA病毒更低。可以考虑对核酸样本进行特殊的处理,对病毒序列进行特异性富集,再进行建库测序。质量控制:病原宏基因组测序技术涉及一系列繁琐的实验操作过程,例如文库构建涉及到基因组打断,测序接头链接,全基因组扩增等多个步骤,每一步骤的目标是要每个分子都以相同的效率执行每个步骤,打断有损失,连接有差别,扩增有偏好,都会带来检测误差。所谓宏基因组学就是一种以环境样品中的微生物群体基因组为研究对象。山东土壤微生物测序公司
病原宏基因组测序可与实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术联合使用,实现优势互补。“RT-PCR由于其检测速度快、操作流程简单、成本较低的原因,更适用于大规模的筛查中,以便快速获得是否为冠状病毒核酸阳性的初步证据,而对于RT-PCR检测阴性、但临床表型高度疑似的患者,利用mNGS进一步确认可有效提高检测结果的可靠性,并获得是否有其他病原体传染的信息。”对于RT-PCR检测阳性的样本,也可以进一步利用mNGS进行病毒全序列的分析,从而帮助获得病毒是否发生变异的信息,为疫苗、药物研发等方面提供可靠证据。四川病原微生物多样性分析快速检测方法是指从样品制备到出具检测结果的整个检测过程中能够在短时间内完成的检测方法。
宏基因组学或元基因组(metagenomics),其定义为“Thecollectivegenomesofsoilmicroflora”。该学科可追溯到第1次提出环境基因组学的概念,在对太平洋浮游生物进行系统分类时构建了第1个噬菌体文库,并发现了15种全新的细菌序列。宏基因组学概念是“土壤中所有微生物基因组的总和”命名为土壤宏基因组,系统给出了宏基因组的概念,提出针对特定环境样品中遗传物质总和进行非培养研究。对宏基因组进一步概括为“应用现代的分子生物学技术直接从环境中获取的目的微生物群落基因组,叫宏基因组”。
宏病毒组分析的常用软件:介绍之前首先我们来看一下宏病毒组的基本分析流程。这里需要说明的是基于病毒颗粒分离技术及NGS测序平台的宏病毒组学研究还处于起步阶段,分析功能模块新的思路和技术层出不穷,但另一个层面,宏病毒组是宏基因组的一个分支,基本大的分析思路方面与宏基因组还是有着不小的相似之处。归纳一下,宏病毒组主要包括一下几个方面的分析内容:病毒群落结构组成分析;病毒群落功能分析;病毒(特别是噬菌体)宿主预测;病毒与群落中细菌、古菌等其他微生物之间的互作网络;基于非数据库比对的新病毒序列的挖掘。医疗保健:准确、快速地鉴定细菌和寄生虫,以进行正确和及时的疾病诊断。
宏基因组概念:宏基因组有广义和狭义两种概念。广义的概念是指所有可能与人的生活密切相关的微生物的基因组,包括长期共生在体内的微生物,也包括可以进入体内,对人类的生活造成不同形式的影响的微生物。而狭义的宏基因组是只指长期共生在体内的微生物。宏基因组测序分析技术:单是共生在人体内的微生物就有1000多种,特别是胃肠道内的微生物为丰富。宏基因组除了这些微生物外,也包括以其他方式偶尔进入人体内的微生物,这些微生物可能形成病源体,影响我们的健康。现在科学家可以分析和发现引起疾病的异常微生物存在与活动,从而保护人体的健康。面对未知病毒,抵抗力是我们健康的屏障。浙江微生物群体多样性分析技术
可以通过控制微生物的生长环境来判断微生物的种属类型。山东土壤微生物测序公司
宏基因组测序技术注意事项:传统微生物检测由于时间长、阳性率低、检测目标单一,限制了传染疾病的诊治。宏基因组测序技术不依赖于微生物的分离培养,克服了传统的纯培养方法的技术限制,为研究和开发利用占微生物种类99%以上的未可培养的微生物提供了一种新的途径和良好的策略。宏基因组测序以无需纯化培养、能够快速全方面的展示序列信息的优势,逐步在临床上得到了普遍应用。病原宏基因组测序检测出病原体并报告相应被检测出的序列数,再依据大数据库判定是否为致病病原体。然而不同的测序平台采用不同的数据库,再由不同的研发、临床和检验**解读,缺乏统一标准,结果也会出现差异。因此仍需将病原宏基因组测序检测数据和临床更好的结合,从而更准确鉴定致病病原体。山东土壤微生物测序公司