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专利申请利用分离培养人尿液来源细胞并收集培养基来进行体外培养，直接把外泌体从尿液中沉降下来，无须分离培养人尿液来源细胞并收集培养基。人尿液来源细胞的外泌体的获取方法，是首先分离培养人尿液来源细胞并收集培养基，将人尿液来源细胞的培养基通过0.22微米滤膜过滤，以去除大的细胞残片以及其它杂质；然后离心除去细胞器，留取上清；再使用可截留100KD分子量的膜，通过离心截留上清中的外泌体，截留完成后，使用PBS对膜进行洗脱即得到外泌体浓缩液。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。杭州外泌体提取试剂厂家推荐

外泌体在肺病进程中的作用：在一些病症微环境中，一些病症细胞来源的外泌体能够诱导CD4+T分化为调节性T细胞，压制机体的抗一些病症免疫反应；肺病细胞分泌的外泌体含有miR-21和miR-29a，可在免疫细胞中结合并启动TLR8，使TLR介导的NF-κB信号通路活化，从而导致一些病症的生长和转移。在肺病的侵袭和转移过程中，细胞间通讯扮演着重要的角色。据有关报道称，NSCLC分泌的外泌体内TGFβ和IL10的高表达与肺病的转移密切相关。此外，启动的T细胞可以通过调控Fas信号通路增加基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达，进而促进肺病的转移。这些机制有望成为肺病治病的潜在靶点。虽然大多数外泌体都是促进一些病症的侵袭与转移，但也有报道称，外泌体miR-302b可以通过压制TGFβRⅡ来压制肺病细胞的转移与增殖。如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物昆明正规外泌体提取试剂供应商聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀。

外泌体的提取方法，先用含无外泌体血清的培养基对人脂肪来源间充质干细胞进行饥饿培养，这样可使干细胞处于正常生长状态，不会被克制生长增殖，其所分泌的外泌体所包含的有效物质也更贴近其自然状态下的外泌体，然后将含有外泌体的培养上清液进行低速差速离心(即先一离心处理、再第二离心处理)以去除细胞及其碎片，用100kd超滤管对低速差速离心后的离心液进行超滤浓缩得到外泌体浓度更高的超滤液，将超滤液经过第三离心处理去除杂质后直接用0.22μm过滤器过滤除菌，过滤掉粒径为220nm以上的物质，进一步得到含颗粒粒径小于220nm的浓缩液，因超滤浓缩处理和第三离心处理使得液体量浓缩，这样过滤除菌效率得到较大提高，较后将浓缩液进行超速离心的第四离心处理分离提取到外泌体。该外泌体的提取方法，既结合了差速离心，又结合了超滤和超速离心，通过该提取流程，较终可高效地从人脂肪来源间充质干细培养上清液中提取到高浓度、高纯度的外泌体，具有操作简单、成本低，适合产业化生产的特点。

PS不是你想有，想有就能有，迄今为止所发现的外泌体，并非所有的外膜表面都暴露PS。例如，细菌来源的外泌体膜表面没有PS，因此，本款试剂不能提取这种外泌体。现在的研究尚未得知是否所有的外泌体上都会露出PS，但是上述的外泌体标记根据细胞种类不同表现出的信号强弱差大，通过利用本试剂盒PS亲和法捕捉、提取外泌体是较好的方法。：这个MagCapture™ExosomeIsolationKitPS，1次提取的外泌体量大概是多少？实验样品的种类和体积不同，提取的外泌体量也不一样。Wako的操作实例中，一次提取操作可获得蛋白量约30μg/mL（BCA法检测），粒子数1~2×1010（NanoSightLM10检测）（经莫能菌素钠刺激外泌体分泌的K562培养上清5mL浓缩为1mL后，对其进行提取）。另外，和光验证了从1mL正常人混合血清提取一次，可回收约34μg/mL蛋白质（BCA法检测），约5×109/mL的粒子数（NanoSightLM10检测）。本试剂盒终可获得100μL的洗脱液。近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒。

外泌体的提取主要包括以下几种方式：一是超速离心法，这是目前外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。五是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法较新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。六是色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不普遍。用于外泌体提取的体液收集注意事项：抽血时间。珠海外泌体提取试剂直销厂家

外泌体提取：免疫分离技术。杭州外泌体提取试剂厂家推荐

外泌体的提取方法：1.超速离心法（差速离心）。超离法是较常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。2.密度梯度离心。在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，是一种区带分离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高，但步骤繁琐，耗时，对离心时间极为敏感杭州外泌体提取试剂厂家推荐