荧光寿命成像显微术是一种利用荧光染料固有特性的成像技术。除了具有特有的发射光谱外,每个荧光分子还有特有的寿命,它反映了荧光基团在发射光子之前处于激发态的时间。除了标准的荧光强度测量外,寿命分析还可以提供其他信息。提高质量,荧光寿命成像提供了额外的信息,有助提高共聚焦成像的质量。 它非常适合用于区分荧...
荧光寿命成像的优势:通过荧光寿命来进行成像,只需要拍摄一次就完成图像采集,不但减少了成像时间,而且降低了激光对样品的损伤。荧光寿命成像使用简单,方便快捷,不需要进行参数调节。荧光寿命成像提供了寿命分布的二维图形视图。荧光寿命是荧光分子在激发态停留的时间,这个时间可以反映荧光分子的内在属性和所处的微环境,是一个很有用的工具。以往,荧光寿命的测量和计算是件非常复杂和耗时的工作,只有少数专业的科学家关注和使用该工具。传统的多色成像实验根据光谱差异来设计,会有串色等限制,而且需要多次采集图像,会造成样品的光损伤。随着技术的发展,在显微镜视野内进行超快速全像素荧光寿命信号采集的荧光寿命成像成为可能。福建分子荧光寿命成像大概多少钱
影响荧光寿命成像测量的因素有哪些?散射光的影响: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影响较大。校正办法:先用短的激发光激发,检出溶液的拉曼峰,然后进行荧光光谱校正。因为荧光光谱不随激发光波长的改变而改变,而拉曼光却随之改变。高浓度样品的影响:1)当激发光照射高浓度样品时,在激发光入口附近产生荧光,但这些荧光并不能进入荧光检测器。2)高浓度的分子之间相互作用而发生活性阻碍现象。3)荧光的再吸收:即荧光光谱的短波长端和激发光谱的长波长端如果相互重叠,则发生荧光再吸收。福建分子荧光寿命成像大概多少钱荧光寿命显微成像,可以定位不同的分子及浓度分布,在生物,材料,半导体领域具有重要的应用价值。
荧光寿命成像技术有两种:时间域和频率域。(1)时域FLIM:需要脉冲光源,所以一般在双光子的系统上比较常见FLIM(荧光寿命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy简称FLIM),理由一是激光是脉冲的,二是买双光子的老师一般也搭配一个FLIM。(2)频域FLIM:需要一个相位调制的光源,有用LED调制的。荧光寿命成像FLIM的应用:1)细胞体自身荧光寿命分析;2)自身荧光相对荧光标记的有效区分;3)具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分;4)活细胞内水介质的PH值测量;5)局部氧气浓度测量;6)活细胞内钙浓度测量;7)时间分辨Forster共振能量转移(FRET):纳米级尺度上的远程测量,环境敏感的FRET探针定量测量。
生物发光与荧光寿命成像不同点:产生光子的原理不同,类似于我们都是通过肉眼去观察萤火虫和发光水母一样,生物发光与荧光成像在本质上,都是机体中特定的细胞或材料发出光子,被高灵敏度的CCD检测到形成图像,但是生物发光与荧光寿命成像产生光子的过程和机制是完全不同的。生物发光与荧光成像相同点:都需要对细胞进行标记。生物发光产生的光子和荧光寿命成像产生的光子都可以被高灵敏的CCD检测并形成图像,就像一个人的眼睛就可以既看到萤火虫又可以看到发光水母一样。除此之外,生物发光和荧光寿命成像都需要对目标细胞进行标记,让细胞产生荧光素酶或者荧光蛋白。将荧光寿命成像与共聚焦成像技术结合起来,实现人体三维荧光寿命成像,实现人体三维功能成像奠定基础。
荧光寿命成像有什么作用?荧光寿命可以在频域或者时间域测量。时间域测量方法涉及用短光脉冲照射样品(比色皿、细胞或组织),然后随时间测量发射强度。FLT由衰减曲线的斜率确定。有几种荧光检测方法可用于寿命测量,其中时间相关单光子计数(TCSPC)可实现简单的数据收集和增强的定量光子计数。频域方法涉及高频率入射光的正弦调制。在该方法中,发射发生在与入射光相同的频率处,并且随着激发光兼有相位延迟和振幅的变化(解调)。寿命测量不需要波长比率探针来提供众多分析物的定量测定。寿命法通过使用光谱位移探针扩展了分析物浓度范围的灵敏度。荧光寿命成像是什么样的技术?福建分子荧光寿命成像大概多少钱
利用荧光寿命成像显微镜技术可实现可以实时监控发光纳米颗粒在活细胞内的稳定性。福建分子荧光寿命成像大概多少钱
荧光寿命成像技术能够实时监控纳米颗粒在细胞内的稳定性。FLIM不但具有其它荧光显微镜所具有的高灵敏度、可检测生物生物样品等优点,它在监控荧光纳米材料的稳定性上还具有以下几个优势:(1)荧光寿命不受荧光探针的浓度的影响,可排除纳米材料的胞吐及细胞分化导致的纳米颗粒的稀释等对测量的影响;(2)很多常见的发光材料的荧光寿命都远远大于细胞的自荧光的寿命,很易去除生物自荧光对荧光成像的干扰;(3)发光材料的荧光寿命和其材料的稳定性密切相关,荧光寿命的改变可以灵敏地反映相应材料的化学稳定性。基于上述原理,他们利用FLIM技术系统考察了半导体量子点和金纳米簇在活的细胞(HeLa)里72小时内的稳定性,以及不同的表面配体对这一过程的影响。福建分子荧光寿命成像大概多少钱
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