福建体液外泌体鉴定

在外泌体中引入药物的方式包括体内装载和体外装载两种。体内药物装载可以通过传统方法(如病毒转染、脂质体转染或电穿孔等)转染来源细胞，编码感兴趣的RNA或蛋白质，也可以使药物与来源细胞共混，使细胞分泌产生含有目标生物分子的外泌体。体外药物装载则首先需要得到纯化的外泌体，然后将感兴趣的药物通过电穿孔或脂质体转染等方法装入纯化的外泌体。外泌体内可装载的药物包括小分子化学药物、蛋白质和多肽、核酸药物、天然产物等。所有真核细胞类型包括造血细胞、上皮细胞、干细胞、脂肪细胞均可在培养条件下分泌外泌体。福建体液外泌体鉴定

外泌体是细胞间信息传递的重要“信使”, 可通过三种方式介导细胞通讯: (1) 外泌体以旁分泌的方式与靶细胞相互作用, 通过受体–配体作用黏附到靶细胞表面, 随后被内吞入靶细胞, 或直接将内容物释放到靶细胞内, 从而激huo靶细胞; (2) 外泌体的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割, 产生的片段可以与靶细胞的细胞表面受体结合, 从而激huo靶细胞; (3) 外泌体还可以与靶细胞直接接触发生膜融合, 导致外泌体中的蛋白和核酸非选择性转移到目标细胞, 从而引起靶细胞的响应。通过介导细胞间的通讯, 外泌体不jin能够参与多种生理过程, 比如消除胞内陈旧分子、呈递抗原、分化调节性T淋巴细胞或髓样细胞以抑制免疫反应, 而且还可以参与疾病形成的病理过程, 如通过与受体细胞的相互作用传播病原物质、促进中流转移过程中的血管生长和中流细胞迁移。福建体液外泌体鉴定外泌体工程实验表明外泌体中的DNA和miRNA参与调节适应免疫和先天免疫反应。

外泌体作为疾病诊断的标志物具有其独特优势:(1)与正常细胞相比，病变细胞产生的外泌体在分泌量和内容物方面存在明显差异。病变的细胞和组织能够产生更多外泌体。(2)由于特殊的生成方式，外泌体的组成不同于来源细胞。其内包含的一些特异性蛋白质能够揭示外泌体的起源、结构和运输方式，有利于深入了解外泌体的产生机制。(3)病变细胞分泌的外泌体通过胞吐的过程进入血液、尿液等体液，囊泡状结构能够保护外泌体内部生物分子不受体液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干扰，有利于保持其结构完整和生物活性，通过对此类体液进行分析可以实现疾病的无创或微创检测。

在利用外泌体运输PTX进行抗中流的研究中，由于间充质干细胞可以归巢(homing)至中流细胞微环境并且可以不通过基因操作即可对PTX运输，因此Pessina等采用间充质干细胞SR4987作为分泌外泌体的母代细胞，而后将SR4987与PTX共混，使SR4987分泌的外泌体含有PTX，再利用超速离心法将载有PTX的外泌体分离出来，研究其对体外人胰腺ai细胞株的影响。结果表明外泌体可以有效的运载PTX并不破坏其功能，小泡(主要指外泌体)溶液的蛋白质浓度在0.047～0.095mg/mL之间时可以诱导中流细胞凋亡50%，这种抑制效果与纯PTX对体外ai细胞的抑制效果相当。外泌体由于包含的内容物具有明显的组织特异性，为其能成为瘤早期诊断的生物标志物提供了重要保障。

通过改变外泌体的溶解性或者分散性, 可以将它们从体液或细胞培养液中沉淀出来。常见的方法是使用聚乙二醇或凝集素来沉淀样品中的外泌体。聚乙二醇是一种水溶性非离子化合物, 不含水的聚乙二醇可以通过“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力, 从而迫使其脱离溶液, 进而在低速离心条件下发生沉降。凝集素是一种具有高度特异性的碳水化合物结合蛋白, 可通过与外泌体质膜糖蛋白上的糖链结合来改变外泌体的溶解性。此外, 还可使用鱼精蛋白、醋酸钠、有机溶剂沉淀等方法进行沉淀分离。干细胞外泌体因在上皮组织的增殖、迁移、再生、炎症和瘢痕控制等方面的作用。福建胸水外泌体粒径检测

干细胞外泌体通过改变细胞外基质，改变受体细胞的转录组和蛋白质组，调节细胞凋亡，生长，增殖和分化途径。福建体液外泌体鉴定

外泌体运输的基因类药物也可以是miRNA，miRNA是一类非编码的内源性RNA，主要用于调节转录后的基因表达。miRNA主要通过与mRNA的未翻译的区域(UTRs)结合起到抑制基因表达和降解mRNA的作用。与siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表达不需要完美的碱基配对，因此每种miRNA可以抑制多种蛋白质的表达，而每种siRNA只针对一种蛋白质。miRNA的运载也存在着种种挑战:miRNA体内稳定性差、生物分布不理想、易被体内酶降解以及容易引起副反应等。越来越多的研究表明外泌体也是体内运载miRNA的优良载体，并且利用外泌体运输miRNA的zhiliao方法已经在许多疾病模型中得以应用。福建体液外泌体鉴定

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