氯喹及其衍生物羟基氯喹zhiliao小细胞肺ai、原位导管ai、原发性肾ai、乳腺ai等目前已经进入临床I期或II期研究阶段, 但是关于抑制自噬zhiliao中流的观点受到很多质疑。首先, 没有证据判断氯喹是通过抑制溶酶体活性还是与溶酶体无关的其他作用发挥抗中流效应的。其次, 也有观点认为自噬可能是化疗过程中促进中流细胞死亡的机制。因为敲低自噬关键蛋白后阻碍了化疗药物诱导的细胞死亡。此外, 众多证据显示, 有些活化自噬的药物同样具有抗中流作用。用于预防家族性乳腺ai的他莫昔芬能够诱导自噬活化。内酯类化合物蟾蜍灵是研究较多的中药有效成分之一,对肝ai和结肠ai的细胞自噬作用更为突出。成都双荧光自噬慢病毒包装
自噬过程中的不同阶段(1)未受诱导细胞(2)自噬诱导及吞噬泡形成(3)自噬完成及(4)与溶酶体融合。1、诱导与吞噬泡形成:为应对多种刺激,通过形成一种独特的平整细胞膜(吞噬泡)诱导自噬。上述过程需要两种蛋白质复合物参与其中,负责调控自噬体形成。2、自噬体延伸与形成:吞噬泡的延伸会导致形成自噬体,一般为双层膜细胞器。此步骤为简单隔离步骤,其中不发生降解。自噬体内外表面均存在LC3B-II。在自噬过程中,LC3的合成与加工均有所增加,且可将其作为标记物监控细胞内自噬水平。3、融合、降解与回收:完全形成的自噬体与溶酶体在细胞内相融合。自噬体-溶酶体的融合机制与同质性液泡膜融合机制相同。4、对囊泡内物质的降解依赖一系列溶酶体/液泡内酸性水解酶完成。由降解产生的小分子,特别是氨基酸,会被重新转运至细胞质内用于蛋白质合成与细胞功能维护。自噬GFP-LC3BTHC可通过抑制细胞自噬途径改善Hhcy小鼠脑缺血损伤。
防己诺林碱是中药粉防己的有效成分之一,1×10-3~1×103 mmol/L的防己诺林碱可激huop53/sestrin2/AMPK通路,诱导HepG2和PLC/PRF/5细胞自噬性死亡,但不诱导细胞凋亡;抑制AMPK通路和干扰Atg5基因后,可削弱防己诺林碱的上述作用,提示防己诺林碱诱导细胞自噬的作用机制可能与激huop53/sestrin2/AMPK通路相关。火麻仁的成分大ma酰B也可通过抑制Akt/mTOR通路诱导HepG2细胞自噬性死亡。另外,姜黄素和阿霉素联合用药后,可诱导HepG2细胞自噬,上调LC3-II的量,提高LC3标记的自体吞噬体和自噬性溶酶体的表达,同时诱导凋亡,也提示联合用药防治肝ai的有效性。
自噬双标系统的工作原理为:未发生自噬的细胞及含有自噬体的细胞中,由于mCherry与GFP共同表达,细胞呈现黄色荧光。当自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体后,酸性的溶酶体环境使酸敏感的GFP荧光淬灭,而mCherry不受影响,进而使自噬溶酶体呈现红色荧光。因此,红色荧光可指示自噬溶酶体形成的顺利程度。红色荧光越多,绿色荧光越少,则从自噬体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬体和溶酶体融合被阻止,自噬溶酶体进程受阻。到目前为止伴随使用自噬晚期抑制剂,通过检测LC3B-I/II 转化是自噬流检测的金指标。
自噬与疾病:1、自噬与代谢:自噬能清理不正常构型的蛋白质,并消化受损和多余的细胞器,是真核细胞中普遍存在的降解/再循环系统。在细胞新陈代谢、结构重建、生长发育中起着重要作用。在饥饿和新生儿早期,自噬作用明显加强,自噬体明显增多。2、自噬与肿细胞:细胞自噬与细胞的关系十分复杂,目前尚未完全阐明。一方面,正常细胞自噬增强,可表现出阻止肿细胞发生的功能;与此相反,阻止细胞自噬有潜在的致瘤可能。另一方面,肿细胞也可通过增强细胞自噬来对抗由缺氧、代谢产物、诊治药物诱导的应激反应。自噬基因的突变可以导致遗传病,自噬机制受到的扰乱还与病症有关。β-细辛醚通过降低游离Ca2+浓度,下调Beclin1的量,降低自噬,发挥对PC12细胞氧糖剥夺损伤模型的保护作用。山东细胞自噬电镜检测
内质网应激中,自噬通过消化蛋白聚集物和错误折叠蛋白维护内质网功能,限制内质网应激反应诱发的细胞凋亡。成都双荧光自噬慢病毒包装
药物分子的自噬促进作用可以是其调整某种疾病的功效所在,例如雷帕霉素在调整克罗恩病等场合进入临床应用,其功能可能有一部分是通过促进自噬来实现的。但另一方面,由于自噬对病细胞的保护作用,某些药物促进自噬的作用可能导致病细胞对其出现耐药性。例如,依维莫司和索拉菲尼作为新型抗病药,其化疗效果主要是通过阻止mTOR来阻止病变细胞过于活跃的代谢,但阻止mTOR导致的自噬上调会抵消一部分该药物的杀伤力。又例如,表皮生长因子受体(EGFR)阻止剂,如厄洛替尼(Erotinib),是一类新型靶向抗病药物,但阻止EGFR也可诱导自噬上调,从而导致病变出现耐药。针对这一问题,已有临床试验将依维莫司/索拉菲尼/厄洛替尼与自噬阻止剂联用,以达到较大化药效的目的。成都双荧光自噬慢病毒包装
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